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[标本处理] 血液染色之后应该先裂红还是应该先染7AAD

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 楼主| 发表于 2022-3-30 17:13:22 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
最近做血液染色,先染表面标记物之后再裂红,上机前加了7AAD染色,发现活率很低(见下图),但是显微镜下可能活率至少40%,所以想请教一下是因为裂红导致有7AAD的假阳性吗?还有关于检测细胞内marker 的时候,是不是不能用染核酸的形式来表征活死。

                               
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发表于 2022-3-31 07:20:18 | 显示全部楼层
你用的红细胞裂解液,是否含多聚甲醛?

如果是用普通的氯化铵裂解液,一般不会影响。
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发表于 2022-4-1 14:57:01 | 显示全部楼层
细胞内maker,已经固定破膜了,那肯定不能用核酸染料7AAD,就是会全都染上。,应该用live/dead, Fixable viability dye 这样的胺基反应染料。红细胞裂解液用的是哪种,会不会是用了一步连裂解带固定的裂解液?如果是,那也不能用7AAD 和PI 这样的死活染料
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 楼主| 发表于 2022-4-7 12:55:23 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-3-31 07:20
你用的红细胞裂解液,是否含多聚甲醛?

如果是用普通的氯化铵裂解液,一般不会影响。 ...

老师您好,我用的是BD的Lysing Solution 10X Concentrate,货号是349202,应该是没有多聚甲醛的
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 楼主| 发表于 2022-4-7 12:56:11 | 显示全部楼层
liuruiluna 发表于 2022-4-1 14:57
细胞内maker,已经固定破膜了,那肯定不能用核酸染料7AAD,就是会全都染上。,应该用live/dead, Fixable v ...

好的,谢谢解答,我用的是BD的Lysing Solution 10X Concentrate,货号是349202
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发表于 2022-4-7 18:32:34 | 显示全部楼层
叶晶 发表于 2022-4-7 12:55
老师您好,我用的是BD的Lysing Solution 10X Concentrate,货号是349202,应该是没有多聚甲醛的
...

BD官网的说明书上面显示,这个裂解液是含多聚甲醛的,所以不能用于7-AAD染死活的实验。
20220407_183055.png

要么换裂解液,要么换死活染料。
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发表于 2022-4-7 21:05:46 | 显示全部楼层
是的  倪老师说得对 BD的裂解液是含有多聚甲醛的,相比于氯化铵裂解稍微会干净点 FSC/SSC细胞分群也会明显一些
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 楼主| 发表于 2022-4-17 16:56:50 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-4-7 18:32
BD官网的说明书上面显示,这个裂解液是含多聚甲醛的,所以不能用于7-AAD染死活的实验。

老师,含有多聚甲醛的裂解液不能用7AAD染色,是因为多聚甲醛在固定的时候会破膜吗?如果换裂解液的话,老师有什么推荐吗?如果换活死染料的话是换成zombie dye系列的吗
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 楼主| 发表于 2022-4-17 17:01:35 | 显示全部楼层
Climber 发表于 2022-4-7 21:05
是的  倪老师说得对 BD的裂解液是含有多聚甲醛的,相比于氯化铵裂解稍微会干净点 FSC/SSC细胞分群也会明显 ...

好的,谢谢,因为我之前只用过这个裂解液,想问一下一般的氯化铵裂解液效果还可以吗?这个是不是可以自己配?
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发表于 2022-4-17 17:09:27 | 显示全部楼层
叶晶 发表于 2022-4-17 16:56
老师,含有多聚甲醛的裂解液不能用7AAD染色,是因为多聚甲醛在固定的时候会破膜吗?如果换裂解液的话,老 ...

多聚甲醛不会破膜,但是固定过的细胞,膜的通透性会增高,所以死活染料容易进入。

两个方案:
1、换死活染料,换成适用于固定样本的死活染料,无论是live/dead还是zombie,都有专门的针对固定样本的型号。
2、换裂解液,我认为这个成本最低,氯化铵裂解液配方,站内有。
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