用CD9检测外泌体为什么不是接近100%的阳性表达率？

yueyuhai

各位老师有没有人用流式检测外泌体，我用的是贝克曼的DxFlex，然后用CD9 FITC检测超离的外泌体样本，结果如下，理论上外泌体是CD9阳性的，但是实际检测的只有1%左右，这是因为超离的样本中含有的外泌体比例低，还是说抗体标记样本方式不对？

                               
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niwanmao

yueyuhai 发表于 2022-4-21 17:32
大家可以看到我的图吗

一般做外泌体，都是需要有参照微球的，可以确定大概的大小所在位置。
用的水、配的试剂都需要干净。不排除因为液路不干净导致的。

yueyuhai

大家可以看到我的图吗

yueyuhai

niwanmao 发表于 2022-4-21 19:43
一般做外泌体，都是需要有参照微球的，可以确定大概的大小所在位置。
用的水、配的试剂都需要干净。不排 ...

倪老师 因为这个仪器配备的最小微球是80nm，我用了80nm的微球来确定阈值，图中80nm以下的就切除了，水和试剂都是测过的，占外泌体样本不到1%

niwanmao

yueyuhai 发表于 2022-4-22 09:12
倪老师 因为这个仪器配备的最小微球是80nm，我用了80nm的微球来确定阈值，图中80nm以下的就切除了，水和 ...

我没做过，只能从理论上探讨一下，一般这么小的直径时，FSC、SSC是不与大小成正比，所以我觉得排除80nm微球阈值以下的信号，是否妥当？

另外，CD9的分群能力，是否需要事先验证一下？