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一步步教你进行小鼠Tfh细胞染色

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 楼主| 发表于 2022-5-14 19:05:24 | 显示全部楼层 |阅读模式

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细胞分离
  • 浸泡在HBSS(或PBS)中机械解离脾脏、淋巴结(LNs)等。
  • 通过轻轻破坏组织并经70 μm过滤器过滤,形成单细胞悬液。
  • 推荐:可以使用红细胞裂解(配方在流式中文网站内搜)对脾脏样本进行红细胞裂解。
  • 在流式缓冲液(一般是含0.2%BSA的PBS)中重悬细胞并计数。

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流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2022-5-14 20:46:17 | 显示全部楼层
半年y 发表于 2022-5-14 20:43
学到了,实际上B220和CXCR5有很大比例的双阳,例如Biolegend官网对于CXCR5抗体的染色图,我自己也做过二者 ...

但是CXCR5的分群效果其实并不好,不会像这个文章中有一个这么明显的双阳,经常会两个峰分不开,好像是因为趋化因子受体容易收到操作影响

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niwanmao + 1 是的

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发表于 2022-5-14 20:43:45 | 显示全部楼层
学到了,实际上B220和CXCR5有很大比例的双阳,例如Biolegend官网对于CXCR5抗体的染色图,我自己也做过二者双染,阳性率非常高,的确需要排除B细胞。同时我通常把Treg和Tfh做在一个配伍里,选择Foxp3-的细胞设门,可以去除Tfr细胞

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流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2022-5-17 17:24:09 | 显示全部楼层
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发表于 2022-5-27 21:34:30 | 显示全部楼层
倪老师 你好 我想请教下这里CXCR5单独用10%RPMI体系的抗体来染的主要原因是啥
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 楼主| 发表于 2022-5-28 14:17:32 | 显示全部楼层
Climber 发表于 2022-5-27 21:34
倪老师 你好 我想请教下这里CXCR5单独用10%RPMI体系的抗体来染的主要原因是啥 ...

趋化因子受体容易受到细胞状态和固定等操作的影响,所以推荐保持细胞良好活力的时候,先染好。
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发表于 2022-5-30 22:15:20 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-5-28 14:17
趋化因子受体容易受到细胞状态和固定等操作的影响,所以推荐保持细胞良好活力的时候,先染好。 ...

谢谢解答
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