关于PMA+离子霉素刺激的问题

xsh123456

请教一下，比如我想检测在某种感染模型中，ICOS+Th细胞和ICOS-Th细胞 多种细胞因子分泌能力的差别，使用PMA+离子霉素刺激细胞，通过流式检测。但是其中存在一个问题，PMA+离子霉素刺激会导致细胞本身ICOS分子表达上升，使得细胞刺激组ICOS+Th细胞含量偏高，请问有什么方法可以避免这种情况发生，谢谢！

niwanmao

可以先分选出，再进行平行刺激对比。

xsh123456

niwanmao 发表于 2022-5-30 16:00
可以先分选出，再进行平行刺激对比。

老师，因为Th和ICOS都是表面分子，能否先染表面markers，然后在PMA加离子霉素刺激，固定破膜，内因子染色？

niwanmao

xsh123456 发表于 2022-5-30 16:08
老师，因为Th和ICOS都是表面分子，能否先染表面markers，然后在PMA加离子霉素刺激，固定破膜，内因子染色 ...

CD4、ICOS染好后，通过流式分选出两群，再进行分组平行刺激，最后进行固定、破膜、胞内因子染色。

xsh123456

niwanmao 发表于 2022-5-30 16:16
CD4、ICOS染好后，通过流式分选出两群，再进行分组平行刺激，最后进行固定、破膜、胞内因子染色。 ...

好的谢谢，我尝试一下

niwanmao

xsh123456 发表于 2022-5-30 16:19
好的谢谢，我尝试一下

具体步骤可参考下面这篇文章，研究的刚好是你需要的形式，他们是用磁珠分选出ICOS+的细胞Löhning M, Hutloff A, Kallinich T, et al. Expression of ICOS in vivo defines CD4+ effector T cells with high inflammatory potential and a strong bias for secretion of interleukin 10. J Exp Med. 2003;197(2):181-193. doi:10.1084/jem.20020632

xsh123456

niwanmao 发表于 2022-5-30 20:55
具体步骤可参考下面这篇文章，研究的刚好是你需要的形式，他们是用磁珠分选出ICOS+的细胞Löhning M, Hut ...

非常感谢

家的感觉

除了利用PMA+Iono刺激之外，也可以利用CD3+CD28刺激吧，人的可以用PHA刺激一下，不知道不同刺激剂对你的ICOS分子表达有没有影响

xsh123456

家的感觉 发表于 2022-6-7 08:20
除了利用PMA+Iono刺激之外，也可以利用CD3+CD28刺激吧，人的可以用PHA刺激一下，不知道不同刺激剂对你的ICO ...

我之前在小鼠模型中实验过，PMA+离子霉素刺激确实会升高ICOS分子表达