分群问题

JC小火山

您好，想请教一下，我做小鼠原代肝细胞的凋亡，单染管和样本管就是不分群是为什么呢。

wxd

不分群的原因有很多。比如早期凋亡细胞很少，坏死细胞又漂浮在培养基中，你收集细胞的时候把漂浮的细胞弃掉了；或者消化清洗细胞的时候消化过度，细胞都碎了；又或者试剂盒过期了染不上；还有流式检测时电压，补偿等设置不合适。这些原因都可能导致细胞不分群。所以只简单说一句不分群是找不到原因的。建议楼主详细描述实验操作，最好能上传原始数据。大家集思广益帮你解决问题。

JC小火山

首先，我是提的鼠的原代肝细胞，之前做就一直不分群，所以有考虑是不是细胞凋亡的太少，于是这次单染管一半细胞诱导凋亡后又加入了没有诱导凋亡的细胞，但依然没有分群。还是说我们提出来的细胞都死了呢，还是我圈门圈的不对。想知道原代肝细胞应该怎么圈门呢。有时候做出来的结果可以明显看到SSC和FSC那个图会分两群细胞，有时候又只有一群，但不论是哪种后面分析出来的单阳管和样本管都不分群。

niwanmao

JC小火山 发表于 2022-6-13 15:00
首先，我是提的鼠的原代肝细胞，之前做就一直不分群，所以有考虑是不是细胞凋亡的太少，于是这次单染管一半 ...

从FSC/SSC来看，这些细胞都已经死了，所以无论你怎么混合，怎么染，都是非特异性染色。

JC小火山

niwanmao 发表于 2022-6-13 16:46
从FSC/SSC来看，这些细胞都已经死了，所以无论你怎么混合，怎么染，都是非特异性染色。 ...

老师，怎么根据FSC和SSC看呢，是因为它都在左下角吗

niwanmao

JC小火山 发表于 2022-6-13 18:32
老师，怎么根据FSC和SSC看呢，是因为它都在左下角吗

一是在最左，其次整体图形分布在对角线上，而不是偏圆

JC小火山

niwanmao 发表于 2022-6-13 19:11
一是在最左，其次整体图形分布在对角线上，而不是偏圆

好的，谢谢老师

JC小火山

niwanmao 发表于 2022-6-13 19:11
一是在最左，其次整体图形分布在对角线上，而不是偏圆

老师，那如果是这样的，做凋亡圈细胞是应该全部都圈呢还是只圈右边那群呢。

niwanmao

JC小火山 发表于 2022-6-14 16:25
老师，那如果是这样的，做凋亡圈细胞是应该全部都圈呢还是只圈右边那群呢。
...

理论上全圈，但是，你这里的左侧细胞群体因为都碎了，所以圈进去反而会影响最终的结果，因此只建议圈右侧信号和上方SSC大的信号。

JC小火山

niwanmao 发表于 2022-6-14 20:04
理论上全圈，但是，你这里的左侧细胞群体因为都碎了，所以圈进去反而会影响最终的结果，因此只建议圈右侧 ...

老师，那我又迷了，细胞碎了、细胞死了和细胞凋亡在FSC和SSC的图上是怎么看出来的