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[淋巴细胞相关] 急求,小鼠th17/treg流式可以一起做吗?

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 楼主| 发表于 2022-6-17 03:12:38 | 显示全部楼层 |阅读模式
2流星
以前师兄师姐做th17/treg都是用一管同时把th17和treg检测了,不加刺激剂及阻断剂,具体步骤如图(分离淋巴细胞→37℃孵育4-6小时→染CD4抗体→固定、破膜→_→染IL-17A和Foxp3)。但是我看文献和试剂厂商的说明书,要分两管分别检测treg和th17。treg的话要同时染CD4、CD25,固定破膜后染foxp3,CD4+CD25+Foxp3+才定为treg。Th17的话要分离淋巴细胞后加诱导分化(佛波酯/离子霉素)和阻断细胞因子分泌的(布雷非德菌素 A/莫能霉素),然后染CD4+ 后固定破膜完了染IL-17A。所以有点疑惑不清楚到底哪个方案合适,以前这个方案有没有问题?一管同时检测的弊端?检测treg时需不需要诱导分化?急求请前辈们予以指导,感谢

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发表于 2022-6-17 13:42:50 | 显示全部楼层
Treg可以无需刺激,但以IL-17检测Th17我记得不用PMA和离子霉素刺激应该是做不出来的。

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发表于 2022-6-17 13:58:14 | 显示全部楼层
同时检测和分开2管检测,这2个方案都可行的。
1管同时检测应该更有优势呀。
Treg是无需诱导分化的。而IL17A静息状态是不表达的,所以文献和实际说明书都会建议刺激活化和阻断。
参考以下BD流式8色实验方案——活化T细胞因子检测
流式8色实验方案-活化T细胞因子检测.pdf (1.02 MB, 下载次数: 16)





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发表于 2022-6-17 16:19:16 | 显示全部楼层
我觉得可以试试刺激+阻断后同时染TH17和TREG
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 楼主| 发表于 7 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-6-17 13:42
Treg可以无需刺激,但以IL-17检测Th17我记得不用PMA和离子霉素刺激应该是做不出来的。

...

好的,谢谢倪老师
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 楼主| 发表于 7 天前 | 显示全部楼层
scaleus 发表于 2022-6-17 16:19
我觉得可以试试刺激+阻断后同时染TH17和TREG

我打算这样试试
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发表于 4 天前 | 显示全部楼层
建议分成两次做,Treg不刺激,Th17刺激,P+I刺激可能会导致Treg的部分死亡,这一点我在小鼠肝脏组织来源的细胞会出现,脾脏来源的则不会,仅供参考。

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