CAR阳性率检测

叶晶

各位道友，最近遇到一个检测的难题，就是我把效应细胞（CAR-T ,单独检测是有阳性率的）和靶细胞共孵育之后就检测不到CAR了，QPCR检测也是有拷贝数的，但是我需要一个百分比的数据，所以想问一下大家这个情况下可以怎么用流式检测到实际的CAR比例，或者说有其他检测方式可以获得一个CAR阳性率的百分比数据吗？

niwanmao

首先，我觉得你得先优化CAR的检测方法，请参见：
2020综述：流式细胞术在CAR-T治疗中的应用
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8479-1-1.html
(出处: 流式中文网)


检测结果，尽可能有阳性分群存在，这是最佳检测结果，否则很容易假阴性。

确认好正确的抗体和标志物后，再去做这个实验，我相信会有理想的结果。

叶晶

niwanmao 发表于 2022-6-20 14:32
首先，我觉得你得先优化CAR的检测方法，请参见：
2020综述：流式细胞术在CAR-T治疗中的应用
https://www.fl ...

谢谢倪老师，我看了，感觉和我现在的情况不太一样，我只能用特异性的抗体或者蛋白来测，因为我共孵育的时候还加了其他的东西，和CAR的scfv结构一样，所以现在不知道要怎么做

niwanmao

叶晶 发表于 2022-6-20 16:35
谢谢倪老师，我看了，感觉和我现在的情况不太一样，我只能用特异性的抗体或者蛋白来测，因为我共孵育的时 ...

按照您前面描述的形式，我总感觉是不是一些非特异性荧光，而不是真正的阳性，所以最后导致共孵育之后，更加降低，就测不到了。
图有吗？或者你把CAR染色样本和未染色（fc阻断过）的叠加在一起，看看峰形和位移如何？

scaleus

已有文献报道：CAR-T在接受抗原刺激后表面CAR会内化并降解，只有少部分会回到膜表面
IMMUNITY. 2020-08-18;53(2)

niwanmao

scaleus 发表于 2022-6-20 17:37
已有文献报道：CAR-T在接受抗原刺激后表面CAR会内化并降解，只有少部分会回到膜表面
IMMUNITY. 2020-08-18; ...

嗯，这种特殊情况是需要考虑的，不过我从描述上看，感觉楼主遇到的应该不会是这个原因，抗体的分群能力，感觉更主要。