补偿实验中抗体的使用

hnsyryx · 发表于 2022-7-19 08:58:59

请教大家一个问题，流式做荧光补偿时，由于所检测的目的抗原表达量较低，可不可以选择用“相同荧光标记但检测其他抗原的抗体”去做补偿？例如，目的是用PE标记的anti-CD25检测，但由于CD25表达量很低，是否可以用PE标记的CD19来做补偿？

Yuck · 发表于 2022-7-19 09:09:59

直接买补偿微球就行。简单实用。

hnsyryx · 发表于 2022-7-19 11:27:25

谢谢您提供的解决办法。回归到我的问题本身，这样的操作可行吗

wxd · 发表于 2022-7-19 13:08:35

理论上是可以的，但是有可能出现这样一种情况：待测的指标表达比你调整补偿的指标低很多，由此导致你的补偿不准确。因此这种只能大致确定以下待测指标的电压以及补偿范围。如果实在没办法，可以尝试用这种方法。但是更建议你使用某种阳性对照药物刺激细胞以使你的待测指标表达量增强以进行检测。使用阳性对照药物还有一个优点就是可以排除你的细胞或者操作的问题。

hnsyryx · 发表于 2022-7-19 15:37:40

我的理解是：补偿只是针对荧光，只要抗体标记是相同的荧光，则用哪种抗体无关紧要，可能我这样理解比较片面？
有的Marker表达就是很低，也没有对应的药物可以用来刺激表达，那该怎么办？

niwanmao · 发表于 2022-7-19 20:10:08

hnsyryx 发表于 2022-7-19 15:37
我的理解是：补偿只是针对荧光，只要抗体标记是相同的荧光，则用哪种抗体无关紧要，可能我这样理解比较片面 ...

你的做法是可以的。

有两点需要注意的是：
1、串联染料不能这样做，因为不同的串联染料批间差比较明显，所以发光特性会有不同。
2、虽然在同一个通道检测，但荧光素种类不同的不能相互替代，如AF488和FITC虽然同一通道，但AF488不能替代FITC调节补偿。

hnsyryx · 发表于 2022-7-20 08:25:24

niwanmao 发表于 2022-7-19 20:10
你的做法是可以的。

有两点需要注意的是：

谢谢倪老师的解答

Yuck · 发表于 2022-7-20 11:19:08

hnsyryx 发表于 2022-7-19 15:37
我的理解是：补偿只是针对荧光，只要抗体标记是相同的荧光，则用哪种抗体无关紧要，可能我这样理解比较片面 ...

可以。不过我一般就是直接选高表达的marker来进行实施，比如各个通道都选CD4，染完调补偿，差别不是很大，准确度也挺好。

闷油瓶 · 发表于 2022-7-25 16:43:24

对于染料为单染料的情况，只要保证电压不变，这样做是没有问题的，串联染料没有试过

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