看看这个直方图是怎么回事？

chujindong

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这个图做的不好，但是不知道是怎么回事。麻烦看看。这是全血做TREG。
看直方图

前面有一小群细胞，不知道怎么回事。圈定的是淋巴细胞，结果直方图就是这样。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-8-3 22:57

                               
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这个图做的不好，但是不知道是怎么回事。麻烦看看。这是全血做TREG。

APC标记的是什么抗体？为什么你觉得不好？如果是FOXP3 APC的话，应该是这样的啊。

chujindong

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抱歉，没说清楚。APC标记的是CD4，这张图是空白对照，APC不可能有阳性。圈定的淋巴细胞群。CD4CD25FOXP3上机以后，前面那群细胞的量明显很多，大概有10%左右。treg的流式我预实验做过两次的，没出现这种情况。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-8-4 17:07

                               
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抱歉，没说清楚。APC标记的是CD4，这张图是空白对照，APC不可能有阳性。圈定的淋巴 ...

是否把散点图放上来看看？会不会是非特异性染色？

chujindong

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空白对照散点图，没看到单核细胞群。

chujindong

哦，刚看了另一个帖子，难道那是死细胞的影响？我测试的图就是对角线上一束。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-8-4 17:25

                               
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空白对照散点图，没看到单核细胞群。

你可以把空白对照中那小群CD4阳性细胞圈中，设为R2，然后把FSC－SSC图的Gate设置为G2=R2。就可以看到这堆细胞的分布是否正常了。

chujindong

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那小群细胞跟CD4是重合的，就是说CD4+的细胞群里也可以看到它。在CD25FOXP3散点图中它的位置是在右上角，呈束状。这么说来还真是非特异性染色。上个图吧，这个做得很烂，但还是厚着脸皮让大家看看吧。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-8-4 17:44

                               
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那小群细胞跟CD4是重合的，就是说CD4+的细胞群里也可以看到它。在CD25FOXP3散点图中 ...

无论如何，你自己发现了问题所在，在经验上又进了一步。这是好事。