自己动手设计多聚体，准确检测各类细菌多糖抗原特异性B细胞

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多糖（PS）抗原是构成许多致病细菌外表面的复杂碳水化合物。细菌 PS 抗原中单糖的具体排列和组成决定了其血清型。PS 抗原是针对肺炎链球菌和无乳链球菌（B 组链球菌）等细菌的保护性抗体反应的主要目标。

• 多糖抗原具有免疫优势--能引起强烈的抗体反应，因此通常被用作疫苗靶标。目前已有针对肺炎双球菌、流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌等的 PS 疫苗。
• 每种细菌血清型都有独特的 PS 抗原结构，这种结构决定了其抗原性、免疫原性和致病性。血清型之间 PS 结构的微小差异也会导致截然不同的免疫反应。
• PS 抗原通过刺激 B 细胞产生血清型特异性抗体来诱导免疫，这种抗体可与细菌表面结合并中和/清除感染。它们是独立于 T 细胞的抗原。
• 与纯化的 PS 疫苗相比，将 PS 与载体蛋白共轭（如在共轭疫苗中）可获得 T 细胞帮助并改善记忆性 B 细胞反应。
• 研究 PS 特异性 B 细胞反应对于了解免疫力的变化非常重要，免疫力的变化可能会影响 PS 疫苗对不同血清型和细菌种类的疗效。这可以为疫苗设计和优化提供依据。

基于 PS 的疫苗可诱导保护性抗体反应，但分析方面的限制阻碍了对 PS 特异性 B 细胞反应的研究。

荷兰莱顿大学传染病中心Hoving D等人介绍了一种可同时检测多种细菌多糖（PS）抗原的特异性B细胞并确定其特征的新方法，并介绍了其开发过程，验证了其效能。

新方法主要优点是能复用多种抗原和标记物、所需样本量小以及能直接分析 B 记忆细胞。步骤包括：

• 用生物素对纯化的细菌 PS 进行化学修饰
• 将生物素化 PS 与荧光链霉亲和素结合生成多聚体
• 使用 PS-链霉亲和素多聚物对外周血单核细胞（PBMC）进行染色
• 用高维流式细胞术分析染色细胞，以识别 PS 特异性 B 细胞并对其进行表型分析

作者利用 14 种 Spn 和 5 种 GBS 血清型的 PS 优化了生物素化、多聚化和染色条件。质量控制步骤验证了 PS 的成功修饰和多聚化。该检测方法能以高度特异性检测到 PBMC 中的 PS 特异性 B 细胞，只与自体 PS 结合，而不与异体 PS 结合。通过结合不同的荧光链霉亲和素，可同时检测多达 15 种 PS 特异性。



后来，作者还将这种检测方法用于分析接种肺炎球菌疫苗前后的个体 B 细胞。接种疫苗可扩增针对 12 种疫苗血清型的 PS 特异性 B 细胞，不同血清型的扩增程度不同。血清型 1 和 3 显示出较少的抗体类别转换为 IgG。表型分析显示了血清型的特异性差异，血清型 1 和 3 与 IgM+ 记忆细胞有关。

最后，还在南非和荷兰的供体中检测到了 GBS PS 特异性 B 细胞。不同血清型和不同人群的比例各不相同，这表明他们曾有过接触。南非人的活化标记表达增加。

以上种种证据表明，该检测方法适用于不同的细菌种类和人群。这种高通量方法能同时量化和深入分析血清型特异性 B 细胞对多种细菌 PS 抗原的反应，有望为疫苗诱导的针对 Spn 和 GBS 等主要病原体的免疫提供有价值的检测手段。

参考文献：Hoving D, Marques AHC, Huisman W, et al. Combinatorial multimer staining and spectral flow cytometry facilitate quantification and characterization of polysaccharide-specific B cell immunity. Commun Biol. 2023;6(1):1095. Published 2023 Oct 28. doi:10.1038/s42003-023-05444-3