CPHEN-06：对小鼠内皮细胞进行细分和分选，分出不同器官特异性内皮以及器官内HEV

niwanmao

编者按：本文翻译自Grant D, Wanner N, Frimel M, Erzurum S, Asosingh K. Comprehensive phenotyping of endothelial cells using flow cytometry 1: Murine. Cytometry A. 2021;99(3):251-256. doi:10.1002/cyto.a.24292  句句都是干货，值得细读。

内皮细胞的功能和形态主要由其位置决定。 内皮细胞的可塑性使其能够根据微环境的变化改变功能和表型。

正确识别和理解特定的内皮细胞表型可以为特定组织的生理和病理提供宝贵的机制基础。 随着内皮功能障碍越来越多地被用作诊断工具，准确检测目标内皮细胞表型的重要性对于进一步开发基于内皮的医学诊断和研究至关重要。

内皮细胞的流式细胞表型分析始于选择内皮细胞特异性标记物。 将泛内皮抗原与一个或多个排除通道标记物结合，可以对所有内皮细胞进行分选和进一步分析。 常用的全内皮抗原和排除性标记物见下表：




器官特异性内皮表型
具有器官特异性的特殊内皮细胞，存在一些特殊标记。 例如，淋巴内皮细胞在功能上与血管内皮细胞有所不同，淋巴内皮表达一些特定标记物（如CD90），而小鼠的血管内皮中不存在CD90。 更多器官特异性内皮细胞的表型特征，见下表（注：带*的标记为损伤后阳性表达；粗体标记是最常用的标记物；下划线标记物说明鼠和人均适用）：



对所描述的内皮细胞亚群进行特征分析应始终遵循经过验证的分选策略。 下图是一个示例分选策略，用于识别三种主要的小鼠肺内皮细胞亚群。 通过活/死染料排除死细胞后，CD45−/Sca-1+的初始分选门选择所有内皮细胞。 然后，可以根据CD90.2和vWF的表达区分不同内皮细胞亚群。肺泡毛细血管、淋巴管和非肺泡血管内皮细胞分别为CD90.2−/vWF−、CD90.2+/vWF−和CD90.2−/vWF+。




器官内的内皮细胞亚群
使用细胞表面标记物和细胞内标记物的组合可以进一步鉴定各种内皮细胞亚群。 将内皮标记物与下表中列出的标记物结合起来，可以按血管大小、血管类型和干细胞性质将内皮细胞分群：


一个可识别的亚群是高内皮静脉（HEV）。 HEV是高度特化的毛细血管后静脉内皮细胞，参与淋巴细胞的运输。 使用淋巴内皮标记物与HEV特异性标记物的组合可分出HEV，并可以根据MECA-79和MECA-367进一步将其分为外周淋巴和黏膜HEV。


可诱导标记物
细胞因子和趋化因子可活化受损内皮细胞，通过诱导内皮活化标记物引起表型变化。 这些上调的分子在炎症反应中起关键作用，主要通过促进白细胞的招募。 上调可诱导标记物如CD54(I-CAM)、CD62P(P-Selectin)和 CD142可以用于识别受损或功能异常的内皮细胞。 内皮细胞的可诱导标记物包括CD54 (I-CAM)、CD62P (P-Selectin)、CD142等。

内皮细胞损伤也会影响PROX-1的特异性。在损伤后，核标记物PROX-1在小鼠肝窦内皮细胞中表达，该细胞特异性标记物与淋巴内皮相关。 PROX-1在血液内皮细胞向淋巴管转分化中起着重要作用，通过诱导增殖、迁移和支持存活。这个转录因子促进淋巴内皮细胞标记物的上调，同时下调血液内皮细胞标记物。
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2024-2-20 10:28 上传

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