帮忙分析一下JC-1检测失败的原因

蓝白小熊

做了两次JC-1检测，但是都失败了，不知道为什么，样品染色处理是老师自己做的（具体怎么样不知道），我只是负责上机操作，请大家帮忙看看是否是我上机操作这块儿出了什么问题。
一、实验材料：培养的细胞株加药和未加药组
二、实验试剂：碧云天JC-1检测试剂盒
三、上机步骤：1、首先作FSC/SSC点状图和FL1/FL2点状图；2、将FL1和FL2的MODE设置为“log”；3、未加药组（JC-1染色）作为control上机，调节各种电压；4、阳性对照组上机调节补偿；5、未加药组（JC-1未染色）上机，测试各种电压是否调节妥当；6、各种样品上机。
四、结果：1、control组在点状图上处于右上象限，但呈现了一种斜率图，似乎是被刀切了一下；

contrl组图形

2、阳性对照组的图形、位置和control组几乎如出一辙，没有任何变化，

阳性对照组

如果强行调节FL2-FL1，可以把图形调节到右下象限

阳性对照组

，但是后面的样品图形完全分析不了，上为control组，下为试验组

样品分析

。
五、讨论：两次上机检测，结果都是一模一样，我首先考虑的原因是阳性对照组根本就没做成功，以致于阳性图作不出来，从而就影响了后续的检测；其次我考虑可能是我上机操作这块儿有某个地方没做对，所以control组的图形这么怪，但究竟哪儿没对，我就不知道啦；最后我考虑可能是JC-1的荧光猝灭时间很快，这位老师处理的时间太长，等她拿来上机时，可能已经发生猝灭啦，所以才会出现这样的图形。
大家可以看看我从屏幕上截下来的图以及最后的结果图，帮忙分析一下，到底是我操作上有失误呢，还是样品处理上有问题。因为这位老师非常急，而我也想弄清楚到底是怎么回事，所以在此发帖求助，希望有能人相助，非常感谢。

爽籁清风

我们做JC-1的时候也是这种情况，做了好多次都没做明白。

蓝白小熊

爽籁清风 发表于 2012-7-9 08:03

                               
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我们做JC-1的时候也是这种情况，做了好多次都没做明白。

那你们分析会是什么原因呢？

niwanmao

蓝白小熊 发表于 2012-7-9 08:09

                               
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那你们分析会是什么原因呢？

一般不会这么容易发生猝灭的。
你能不能上一张FL2/FL3的图？我看你的FL3电压为什么调到600多？

蓝白小熊

niwanmao 发表于 2012-7-9 08:47

                               
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一般不会这么容易发生猝灭的。
你能不能上一张FL2/FL3的图？我看你的FL3电压为什么调到600多？ ...

倪老师，红光和绿光不是FL1和FL2么？我根本就没调过FL3，那可能是以前做其他实验调节的，就没管过。

niwanmao

蓝白小熊 发表于 2012-7-9 09:06

                               
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倪老师，红光和绿光不是FL1和FL2么？我根本就没调过FL3，那可能是以前做其他实验调节的，就没管过。 ...

所以我在想，你下次是不是可以试试把FL3调到最低？

蓝白小熊

niwanmao 发表于 2012-7-9 10:25

                               
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所以我在想，你下次是不是可以试试把FL3调到最低？

行，我下午试试看，非常感谢。

niwanmao

蓝白小熊 发表于 2012-7-9 11:22

                               
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行，我下午试试看，非常感谢。

对了，补偿尽量不要设。

蓝白小熊

niwanmao 发表于 2012-7-9 11:29

                               
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对了，补偿尽量不要设。

不设补偿？那阳性对照的位置高居不下，怎么办呢

niwanmao

蓝白小熊 发表于 2012-7-9 15:28

                               
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不设补偿？那阳性对照的位置高居不下，怎么办呢

阳性对照很高吗？没分成两群？如果那样的话，适当设一点。反正原则就是尽量使正常细胞处于右上角而且成群比较集中。