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楼主: aivy

[其它] 求教小球的问题

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发表于 2013-10-23 20:32:29 | 显示全部楼层

你不能用PBS重悬,应该用去离子水才行,一般合成的微球遇到含离子的溶液容易聚集。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2013-10-24 09:23:16 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2013-10-23 20:32
你不能用PBS重悬,应该用去离子水才行,一般合成的微球遇到含离子的溶液容易聚集。 ...

那我加到血清里面怎么处理?是指我能否先做一管去离子水加微球的做标定,再做一管血清的,最后做一管血清加微球的?
用去离子水去稀释微球的话用vortex分散够不?还是一定要用超声分散?

多谢
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发表于 2013-10-24 09:32:10 | 显示全部楼层
dragonhzqsmmu 发表于 2013-10-24 09:23
那我加到血清里面怎么处理?是指我能否先做一管去离子水加微球的做标定,再做一管血清的,最后做一管血清 ...

用去离子水配制的话,直接振荡看看效果吧。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2013-10-28 19:56:58 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2013-10-24 09:32
用去离子水配制的话,直接振荡看看效果吧。

根据老师的建议用去离子水效果好多了,0.5um的我用的是sigma的带荧光标记的微球,1um的是invitrogen的不带荧光的微球,不知道这样标记对不对,里面的MPs门是否就是microparticles 0.5-1um的范围?
MP.jpg
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发表于 2013-10-28 20:08:48 | 显示全部楼层
dragonhzqsmmu 发表于 2013-10-28 19:56
根据老师的建议用去离子水效果好多了,0.5um的我用的是sigma的带荧光标记的微球,1um的是invitrogen的不 ...

FSC怎么跨度这么大呢?
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发表于 2013-10-28 20:58:45 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2013-10-28 20:08
FSC怎么跨度这么大呢?

这个因为做的是微粒,直径在0.5um到1um之间,比细胞小很多,所以用的是对数轴
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发表于 2013-10-28 21:48:03 | 显示全部楼层
dragonhzqsmmu 发表于 2013-10-28 20:58
这个因为做的是微粒,直径在0.5um到1um之间,比细胞小很多,所以用的是对数轴 ...

我的意思是说1um的微球这么集中,为什么0.5um的微球FSC坐标这么分散?
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发表于 2013-10-28 21:54:37 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2013-10-28 21:48
我的意思是说1um的微球这么集中,为什么0.5um的微球FSC坐标这么分散?

这个我也不清楚,1um的微球是基本上做这个实验都推荐的,0.5um的则是我看到有文献提到的具体的货号买的,而且这个0.5um的微球其实主要是用来做细胞吞噬追踪用的,当然也有人用它来定MP的下限,我用dd水稀释后来看的话vortex以后0.5um的好像是分两群,我图里面标记的上面还有一小群,可能是微球形成的二聚体,确实没有1um微球那么集中,是不是我用的浓度太大了,我是0.5ul微球稀释到2mldd水里面的
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发表于 2013-10-28 22:03:34 | 显示全部楼层
dragonhzqsmmu 发表于 2013-10-28 21:54
这个我也不清楚,1um的微球是基本上做这个实验都推荐的,0.5um的则是我看到有文献提到的具体的货号买的, ...

管路会不会有点脏?
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发表于 2013-10-28 22:32:03 | 显示全部楼层
本帖最后由 dragonhzqsmmu 于 2013-10-28 22:38 编辑
niwanmao 发表于 2013-10-28 22:03
管路会不会有点脏?

这个不好意思,应该是比较脏,我跑dd水的样本,出来的信号也比较多,这个大清洗一下,反复冲洗会好点吗?之前跑细胞问题不大,跑MP的话背景比较高,另外我们用的是国产的流式管,感觉质控方面做得没有BD原装的好,塑料材质一般,做这种MP的实验是否最好改用进口的管子减小背景?

顺便向老师求一下管路彻底清洗的protocol
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