凋亡单标染色

lin850424

一般提取完细胞后直接单标染annexin-v-fitc或者PI应该显示细胞比较少吧，会影响调补偿吗？
需要诱导凋亡？问题是诱导后细胞形态会变吧，大家还有别的好的办法吗？

samly0

我觉得最简单的办法，就是用离心管或者流式管取点对照组的细胞悬液放到超净台开紫外灯照个半小时以上，或者放到水浴锅50度左右5-10分钟，再用这细胞来做单标补偿好了。

niwanmao

凋亡后细胞形态会有所变化，但如果你的细胞比较纯，圈出来还是没有问题的，如果细胞很杂，建议和其它系列特异性标记一起用，可以更特异的设门。
ANNEXIN V/PI与表面或胞内标记一起染色的protocol参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3078-1-1.html

lin850424

niwanmao 发表于 2014-3-18 20:05
凋亡后细胞形态会有所变化，但如果你的细胞比较纯，圈出来还是没有问题的，如果细胞很杂，建议和其它系列特 ...

我主要想问的是补偿调节问题，如果细胞早期凋亡或者死亡的比较少，荧光表达会比较少啊，我们应该如何调节FITC和PI的补偿呢！

niwanmao

lin850424 发表于 2014-03-18 22:03:29

                               
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我主要想问的是补偿调节问题，如果细胞早期凋亡或者死亡的比较少，荧光表达会比较少啊，我们应该如何调节

新手还是建议做个阳性标本调节补偿

leosurely

凋亡实验和表染实验中的补偿还不太一样，实验组间的单标补偿值差异都很大，用一组细胞做的补偿可能根本不适用于其他实验组，这就让我怀疑凋亡实验做补偿有意义吗？难道每组细胞都要用单标做一个补偿？

niwanmao

leosurely 发表于 2014-3-19 21:28
凋亡实验和表染实验中的补偿还不太一样，实验组间的单标补偿值差异都很大，用一组细胞做的补偿可能根本不适 ...

好像我在做的时候都还行嘛

samly0

我做的肝癌和淋巴瘤细胞株，以及原代分离的脾脏淋巴细胞也还行，补偿差异也没那么明显啊，调好补偿后上其他管基本是不用再调

lin850424

samly0 发表于 2014-3-18 17:49
我觉得最简单的办法，就是用离心管或者流式管取点对照组的细胞悬液放到超净台开紫外灯照个半小时以上，或者 ...

是不是也可以用此方法来进行阳性对照啊，就是把抗体加全，再紫外照射或水浴，看其阳性表达。

niwanmao

lin850424 发表于 2014-3-21 15:39
是不是也可以用此方法来进行阳性对照啊，就是把抗体加全，再紫外照射或水浴，看其阳性表达。 ...

水浴可能比较难控制，紫外照射我觉得倒是可以试试。