Th17是否没有标记好？

zxxfighting · 发表于 2014-7-5 15:16:22

倪老师，您帮我看看这几张图，是因为我自己做实验的时候膜没破好，抗体没有染上呢，还是因为检测时仪器没有调好呢？我用的是Ebioscience的流式抗体
操作步骤基本上是按照说明书上来的。由于当天不能马上检测，所以我加入Fix/Perm后是4℃过夜（大概6小时），第二天早上继续往后做的。

niwanmao · 发表于 2014-7-5 19:49:29

从图中看，似乎CD4的表达也不太好。你下次试试染好表面标记后，先加入固定成份过夜，第二天早上再进行破膜和胞内染色。

zxxfighting · 发表于 2014-7-5 20:22:54

我就是这样做的。只不过破膜和胞内染色时间只有40min左右。

niwanmao · 发表于 2014-7-5 21:14:57

zxxfighting 发表于 2014-7-5 20:22
我就是这样做的。只不过破膜和胞内染色时间只有40min左右。

你要不换一种破膜剂试试？例如Invitrogen的fix&Perm或者Beckman的Perfix nc

dragonhzqsmmu · 发表于 2014-7-5 21:16:09

zxxfighting 发表于 2014-7-5 20:22
我就是这样做的。只不过破膜和胞内染色时间只有40min左右。

你是破膜和胞内染色分开来做的吗？之前有人使用破膜液稀释抗体然后破膜的同时进行染色操作的

zxxfighting · 发表于 2014-7-5 22:13:42

dragonhzqsmmu 发表于 2014-7-5 21:16
你是破膜和胞内染色分开来做的吗？之前有人使用破膜液稀释抗体然后破膜的同时进行染色操作的 ...

我是将破膜剂和抗体一起加的，4℃避光孵育

niwanmao · 发表于 2014-7-6 12:47:16

zxxfighting 发表于 2014-07-05 22:13:42

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我是将破膜剂和抗体一起加的，4℃避光孵育

要么调整时间，试试室温破膜一个小时。要么从别人那里借一点其他牌子的破膜剂试试

zxxfighting · 发表于 2014-7-7 06:56:17

niwanmao 发表于 2014-7-6 12:47
要么调整时间，试试室温破膜一个小时。要么从别人那里借一点其他牌子的破膜剂试试 ...

好的，我再试试。谢谢倪老师！

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