最近刚做白血病免疫分型，有些细节问题请教

FCMao

最近刚做白血病免疫分型，无人指导，很多都不懂。

1. cCD3,cCD79a,cMPO,CD45染色时，是选A：先染45，加A液孵育洗涤后，加B液和 cCD3,cCD79a,cMPO组合抗体孵育。B：先裂红，加B液时加入所有抗体组合。哪个方法效果好？抗体与B液孵育时间，请教过别人，有的是15-20min，有的30min，15min够吗？

2，  cCD3,cCD79a,cMPO组合和cTdT这类胞浆检测，需要做只标记CD45的作为空白对照吗？

3. 最近做了一粒患者，去年初诊时分型结果是CD19+，CD34+，DR+，38+，10+，cCD79a，cTDT+提示B-ALL。最近检测只检测到CD34+，DR+，38+，10+。不知道是否我做的有问题。是否因为19的克隆号不对，用的是美天妮的抗体克隆号为LT19，另外检测 cCD3,cCD79a,cMPO组合和cTdT这类胞浆检测时，我没有做空白对照，不知道是否是这些原因导致。

因为我刚刚开始做分型，很多问题不懂，希望老师指点一下，不胜感激。

niwanmao

1、你说的是BD的破膜剂kit吗？一般情况下用第一种方法，B液和抗体的孵育时间30分钟至少，太短不行。
2、不能用空白对照，而是用内对照。即患者残留的正常细胞作为参照物。
3、克隆号改变可能会导致检测结果不同，分析时可以采用内对照进行设门。

如仍不明，可将疑难的FCS文件传上来看看。

FCMao

非常感谢倪老师{:soso_e163:}，是BD的破膜剂。之前做骨髓瘤免疫分型的时候，κ、lambda检测一直用的是第二种方法，没有问题，现在做白血病才听说很多人用第一种方法。麻烦您帮我看看结果有什么问题，比如电压补偿方面。因为经验较少，也未参加过正式培训，很多都不敢确定，压力山大。{:soso_e140:}

FCMao

niwanmao 发表于 2014-8-5 21:01
1、你说的是BD的破膜剂kit吗？一般情况下用第一种方法，B液和抗体的孵育时间30分钟至少，太短不行。
2、不 ...

麻烦倪老师帮我看一下哪里有问题，非常感谢。

niwanmao

FCMao 发表于 2014-8-5 21:37
非常感谢倪老师，是BD的破膜剂。之前做骨髓瘤免疫分型的时候，κ、lambda检测一直用的是第二 ...

补偿似乎是没有调节好，建议采用diva软件里面的自动补偿功能做一些单染管试试。
CD19反复看了下，似乎真是阴性，谨慎起见，如果能够搞到另外一个克隆号的CD19试试最好。

FCMao

niwanmao 发表于 2014-8-5 22:14
补偿似乎是没有调节好，建议采用diva软件里面的自动补偿功能做一些单染管试试。
CD19反复看了下，似乎真 ...

感谢倪老师的回复。我今天又找了其他克隆号的CD19，结果强阳性，确实是克隆号的问题。另外，又重复做了cTDT和cCD79a组合，结果确实都是阴性，补偿也没问题，抗体孵育时间也延长了，抗体BD的，抗体本身也不存在问题。想请教一下B-ALL的患者这样的情况有见过吗？实在很困惑。。。难道这个人在疾病进展过程中变异了？

niwanmao

FCMao 发表于 2014-8-6 21:12
感谢倪老师的回复。我今天又找了其他克隆号的CD19，结果强阳性，确实是克隆号的问题。另外，又重复做了cT ...

胞内的抗体除了跟其质量有关外，很多情况下容易受到破膜剂质量的影响，所以不排除破膜剂的问题。
但是出现抗原漂移也不是说不可能，建议还是在排除破膜剂、抗体质量的情况下再考虑漂移。

FCMao

niwanmao 发表于 2014-8-6 21:55
胞内的抗体除了跟其质量有关外，很多情况下容易受到破膜剂质量的影响，所以不排除破膜剂的问题。
但是出 ...

谢谢倪老师，准备把样本送到外院检测确认，另外破膜剂影响也已排除，上次用的是BD的A，B液破膜剂，为防止破膜剂时间放置较长（其实也未过期），这次用换了刚刚到货的。

niwanmao

FCMao 发表于 2014-8-6 22:03
谢谢倪老师，准备把样本送到外院检测确认，另外破膜剂影响也已排除，上次用的是BD的A，B液破膜剂，为防止 ...

一般我觉得CD19强表达的，cyCD79a阴性可能性很小的。

好的，期待您的反馈。

FCMao

niwanmao 发表于 2014-8-6 22:05
一般我觉得CD19强表达的，cyCD79a阴性可能性很小的。

好的，期待您的反馈。 ...

倪老师，你好，细胞表面的抗原阳性阈值是20%，想问一下这类胞浆抗原的阳性阈值是多少？包括cMPO, cTDT， cCD79a。和细胞表面的是一样吗？