有两个峰的直方图怎么分析？

cellprobe

niwanmao

cellprobe 发表于 2014-10-25 22:02
原始数据上传了。抗体是ENOX2的，抗体和isotype control都是goat的，都是PE标记的。谢谢！ ...

看了下你每一个图，似乎都是双峰形态的（如下图），而且跟细胞群无关。那么我觉得目前的数据只能如下设门。至于为什么会出现两个峰，我怀疑跟你使用的抗体浓度过高有关系，还是需要进行抗体滴定（具体滴定方法请搜索本站）。

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同一个细胞用抗体和isotype control染出来的都有双峰，红色的是isotype contro.别人问我这种情况怎么分析？我的gating strategy？谢谢。多个细胞都出现这样的情况。

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图片上传了。

niwanmao

cellprobe 发表于 2014-10-25 20:07
图片上传了。

1、请详细说一下你标记的抗体和荧光素。
2、将原始FCS传上来。

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niwanmao 发表于 2014-10-25 21:08
1、请详细说一下你标记的抗体和荧光素。
2、将原始FCS传上来。

原始数据上传了。抗体是ENOX2的，抗体和isotype control都是goat的，都是PE标记的。谢谢！

cellprobe

niwanmao 发表于 2014-10-26 20:32
看了下你每一个图，似乎都是双峰形态的（如下图），而且跟细胞群无关。那么我觉得目前的数据只能如下设门 ...

谢谢。这个浓度是客户指定的浓度。我当时汇报的数据是一列有浓度梯度的，但是领导硬要让我用客户指定的浓度，100微升的体积，加了3微克抗体，我从来没有用过这么高的浓度。

niwanmao

cellprobe 发表于 2014-10-26 20:39
谢谢。这个浓度是客户指定的浓度。我当时汇报的数据是一列有浓度梯度的，但是领导硬要让我用客户指定的浓 ...

跟客户沟通一下，这个浓度做出的结果 不行。

cellprobe

niwanmao 发表于 2014-10-27 10:34
跟客户沟通一下，这个浓度做出的结果 不行。

对的。我在摸索最佳浓度。肯定是抗体浓度的。问题。

cellprobe

niwanmao 发表于 2014-10-27 10:34
跟客户沟通一下，这个浓度做出的结果 不行。

倪老师，是这样的。我也开始以为是抗体浓度过高。我接下来做个浓度梯度，抗体的浓度是从30ug/ml一直减到1ug/ml. 在30和20ug/ml的时候仍然出现了双峰，但是当抗体抗体浓度降低到5-1ug/ml的时候，只有一个峰。我以为真的是抗体浓度过高导致。但是我把高浓度抗体染过的样品用7AAD染色，gate去除死细胞后，发现非特异性的峰不见了，只剩下一个峰。所以我更倾向的认为非特异的峰是因为死细胞造成的。我用的是PE，在FL2。7AAD在FL3.