之前在论坛里面发过类似的帖子,现在已经开始做了,遇到了更加具体的问题,具体设计如下:
大鼠的外周血的th1/th2/th17/treg比例的检测
1. 空白管;
2.CD4+-FITC/CD 25+-APC/Foxp3-PE;
3.CD 4+-FITC/IL4-PE/IL 17A-pecy7 /IFn- γ-ALEXA 647;
4.所对应抗体的同型对照管(共有五个,共一管)
预实验中,FOXP3出来的结果还好,表达也不错,后面上图。但是,什么都有个但是,IL17A-PEC7和IFNγ ALEXA 647基本不表达, IL4-PE少量表达。
流式老师说,应该是刺激阻断剂的问题,我刺激阻断剂买的是Cell Stimulation Cocktail (plus protein transport inhibitors) (500X),100ul的体系加0.02ul。和试剂公司交流,试剂公司说试剂绝逼没有问题。IL17是EB的,IFNγ和IL4是BD的。cocktail是EB的。破膜固定用的是EB的Foxp3 / Transcription Factor Staining Buffer Set Kit,胞内的也用的这个破膜固定。
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