破核膜破死细胞会怎么样

以梦为x马 · 发表于 2015-12-26 21:08:39

背景：我测的是IL-17+T占CD4+T的比例。死细胞对目的细胞检测的影响
1、不用PI之类能区别死活细胞特异染料，还有什么其他方法来区别死细胞和活细胞？大鼠脾细胞，用FICLL分离之后，加CD4抗体，用破核膜破膜剂之后，再加IL-17抗体，得到图1，有一个主群，那死细胞在破核膜之后是成为主群里的一部分还是变成碎片？2、我把破核膜破膜剂换成破包膜的破膜剂，其他条件不变，细胞来源于同一脾细胞，但是得到图2，左边这群是死细胞吗？

niwanmao · 发表于 2015-12-26 23:04:04

细胞碎片在图1圈门的左侧。
你图2.2圈的是死细胞，所以会存在较强的CD4非特异性染色，并且也因为与淋巴细胞区域有部分重叠，所以导致IL17也会有一点点的表达。

以梦为x马 · 发表于 2015-12-27 08:46:05

老师，圈门的左侧是碎片，那图1中死细胞在哪呢，还是说破核膜之后死细胞全部成为碎片？

niwanmao · 发表于 2015-12-27 16:57:37

以梦为x马发表于 2015-12-27 08:46
老师，圈门的左侧是碎片，那图1中死细胞在哪呢，还是说破核膜之后死细胞全部成为碎片？ ...

图1中，死细胞和碎片可以认为在一起，但是左侧那个区域基本上还是碎片可能性大。

972676742 · 发表于 2015-12-28 09:54:35

niwanmao 发表于 2015-12-27 16:57
图1中，死细胞和碎片可以认为在一起，但是左侧那个区域基本上还是碎片可能性大。 ...

破核膜和破胞膜的分群图为什么会有这么大的差异？

RIVA · 发表于 2015-12-28 14:13:46

你的CD4用的FITC，IL-17A用的PE，所以你用不了PI,可以用7-AAD也行哈~

niwanmao · 发表于 2015-12-28 16:13:23

972676742 发表于 2015-12-28 09:54
破核膜和破胞膜的分群图为什么会有这么大的差异？

破核膜和破胞膜都会影响形态，至于为什么这么大差异，跟破膜剂的成分不同有关。

以梦为x马 · 发表于 2015-12-29 18:36:25

RIVA 发表于 2015-12-28 14:13
你的CD4用的FITC，IL-17A用的PE，所以你用不了PI,可以用7-AAD也行哈~

我一直想着如何不用这些与死活相关的染料，感觉挺难的，所以还是选好破膜剂把

以梦为x马 · 发表于 2015-12-29 18:37:26

竟然在流式中文网看到了我的帖子，好棒的

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[细胞因子检测] 破核膜破死细胞会怎么样