请问细胞内活性氧检测实验几个细节

杜拉拉

老师好！
请问体外培养细胞的细胞活性氧检测时，细胞暴露时化合物能用DMSO作溶剂吗？听说DMSO会影响.OH自由基，请问常用什么溶剂助溶暴露？谢谢：）另外，我想咨询一下实验中PMA(phorbol myristate acetate)的作用是什么？我看到一篇文献中用NAC(N-acetyl-L-cysteine),两者有什么不同啊？我想用DCFH-DA做染料。请指教，多谢呀:)

niwanmao

1、请见DCFH-DA的配制：
DCFH-DA, 1 mg/ml
Dissolve DCFH-DA (2′,7′-dichlorofluorescin diacetate; mol. wt. 487; Molecular Probes) at 1 mg/ml in DMSO.
Store dry and protected from light up to six months at −80°C.
Dye should be stored in 50-
l aliquots to avoid refreezing可见，DCFH-DA本来就是溶解在DMSO，所以DMSO应该不会影响活性氧的检测。
2、PMA是用来活化细胞的，使我们可以检测到细胞内的活性氧水平，同时我们需要使用不刺激的细胞作为本底对照。
3、NAC我没用过，应该是另外一种活化物，作用跟PMA应该差不多，只是可能使用在不同的细胞种类上。

杜拉拉

谢谢老师！活性氧检测中一般是使用H2O2作为阳性对照是吧？一般设几个浓度梯度呢？我看文献报道设阳性对照有0.05mmol的 也有设1mmol的，浓度差别好大，请问哪个比较合适啊？:)

niwanmao

谢谢老师！活性氧检测中一般是使用H2O2作为阳性对照是吧？一般设几个浓度梯度呢？我看文献报道设阳性对照有 ...
杜拉拉 发表于 2010-11-10 11:10

                               
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阳性对照一般是不设浓度梯度的，选择哪个浓度我觉得要根据细胞类型而定。

杜拉拉

多谢老师：）

杜拉拉

老师好，请问Current Protocols in Cytometry一书中9.7.2 OXIDATIVE Metabolism 一章中说的加入PMA后立即将管上机检测保证一个真实零值详见“As soon as PMA has been added, run the tube on the flow cytometer to ensure a true zero value."是什么意思？而你说的PMA是用来活化细胞的，使我们可以检测到细胞内的活性氧水平，（是指的PMA加入可以增加可检测到的活性氧水平么？初次接触我不是很理解）我看到文献中讲NAC能抑制H2O2作用后HepG2细胞内ROS产生率，见文献N一乙酰半胱氨酸对内质网应激介导的HepG2细胞凋亡的作用。是不是PMA和NAC作用机理不同啊？我想用体外细胞做实验，您主要是用人中性白细胞做实验么？PMA主要针对人血细胞么？请指教谢谢！

niwanmao

老师好，请问Current Protocols in Cytometry一书中9.7.2 OXIDATIVE Metabolism 一章中说的加入PMA后立即将 ...
杜拉拉 发表于 2010-11-12 10:13

                               
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NAC没接触过，能不能把那篇文献放上来看看？

niwanmao

protocol中的那句话的意思是：PMA加入标本后，立即上机，作为0时间点的基准值，然后经过一定的时间（如10分钟），检测下一个时间点的标本活性氧水平，反映出PMA随着时间的推移，不断的活化细胞活性氧。
PMA主要对中性粒细胞做的比较多，对其它细胞有没有作用不清楚，你可以查查相关文献看。

杜拉拉

文献名是“N一乙酰半胱氨酸对内质网应激介导的HepG2细胞凋亡的作用”中华肝脏病杂志2008年7月第16卷第7期Chin J Hepatol，July 2008，V01．16，No．7 page524-527,文献如何上传我不会，请帮忙，我感觉上面讲的NAC作用与PAC作用正好相反呢？请指教：）

niwanmao

文献名是“N一乙酰半胱氨酸对内质网应激介导的HepG2细胞凋亡的作用”中华肝脏病杂志2008年7月第16卷第7期Ch ...
杜拉拉 发表于 2010-11-18 15:28

                               
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