ser473磷酸化流式细胞术

chevalierx

我用过perm 1染小鼠p-Akt Ser473，能染上，37℃水浴环境，Fix/Lyse时间10min，RT破膜时间20min左右。考虑下荧光素是不是太大进不去？印象里以前做胞内细胞因子染色，有种说法是不要挑太大的荧光素，因为如果孔没打好，偶联大荧光素的抗体可能进不到胞内

niwanmao

Wlmedicine 发表于 2019-1-16 16:07
核标记的流式抗体和表面标记的流式抗体，也需要调节补偿？

需要调节的。

Wlmedicine

chevalierx 发表于 2019-1-16 23:21
我用过perm 1染小鼠p-Akt Ser473，能染上，37℃水浴环境，Fix/Lyse时间10min，RT破膜时间20min左右。考虑下 ...

当时选择了比较强的荧光素PE，但PE是protein fluorophores。这个应该也是需要考虑的因素。你的perm用的是什么？s473的荧光素呢？

Wlmedicine

niwanmao 发表于 2019-1-17 10:50
需要调节的。

现在发现s473有时候染的出来，有时候然不出来的一个原因是电压的问题。因为我同时在两台流式仪上检测，一台测出来，一台没有测出来。

niwanmao

Wlmedicine 发表于 2019-1-17 11:04
现在发现s473有时候染的出来，有时候然不出来的一个原因是电压的问题。因为我同时在两台流式仪上检测，一 ...

电压当然重要喽，否则也不会提“电压优化”这个词了。

chevalierx

Wlmedicine 发表于 2019-1-17 11:03
当时选择了比较强的荧光素PE，但PE是protein fluorophores。这个应该也是需要考虑的因素。你的perm用的是 ...

BD的perm 1呀，比较便宜的那个。其实在染色之前，你可以去查下BD的数据库，我记得BD有个数据库，里面给出了不同的perm对不同蛋白的不同磷酸化位点，偶联不同荧光的偏移程度。我用的BV421标记的p-Akt Ser473，我同时用PE标记的另一支磷酸化抗体标记的别的蛋白，PE的结果挺稳定的。