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[细胞因子检测] CD4细胞IFN-g信号为什么这样子

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发表于 2019-8-5 17:43:29 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
倪老师,麻烦您帮我看看,我用的流式仪是BD FACSAria 2,测了IFN-G信号,结果发现CD4细胞的IFN-G信号测不出来,每个样本都这样,我用其他配色用CANTON 2测了是可以测出来的,所以我现在不明白是哪里出问题了,麻烦老师了!

CD4和CD8细胞的IFN-g信号

CD4和CD8细胞的IFN-g信号
发表于 2019-8-6 22:51:19 | 显示全部楼层
似乎电压整体都偏低。
CD4和CD8的分群不好,上级门是什么?
 楼主| 发表于 2019-8-8 18:30:26 | 显示全部楼层
本帖最后由 当你老了 于 2019-8-8 18:32 编辑
niwanmao 发表于 2019-8-6 22:51
似乎电压整体都偏低。
CD4和CD8的分群不好,上级门是什么?

老师,我是这样画图的,不知道为什么,CD4和CD8在有些样本分的清楚有些分的不清楚。
这个实验做了很多个样本了,现在压力也很大,不知道这是哪里出的问题,麻烦老师帮我看看了

x294 ra.jpg
发表于 2019-8-8 22:33:37 | 显示全部楼层
当你老了 发表于 2019-8-8 18:30
老师,我是这样画图的,不知道为什么,CD4和CD8在有些样本分的清楚有些分的不清楚。
这个实验做了很多个样 ...

上级门不纯,建议加一个CD3作为上级门,CD8分群就会清楚起来。
此外,IFN-g染不出来,我觉得可能需要从样本的培养和刺激上面找一下原因先。
 楼主| 发表于 2019-8-9 08:16:04 | 显示全部楼层
本帖最后由 当你老了 于 2019-8-9 08:44 编辑
niwanmao 发表于 2019-8-8 22:33
上级门不纯,建议加一个CD3作为上级门,CD8分群就会清楚起来。
此外,IFN-g染不出来,我觉得可能需要从样 ...

好的 非常感谢老师我也有想过IFN-g染不出来是培养的原因,所以几个样本做对照,就是用同样的细胞,一份只染三个色,另一份染了七个色,因为条件限制,所以三色和七色的在不同仪器上机,结果就是三色的CD4细胞IFN-g染出来了,七色的染不出来。

七色,CD4的IFN-g染不出来

七色,CD4的IFN-g染不出来

三色,CD4的IFN-g染不出来

三色,CD4的IFN-g染不出来
发表于 2019-8-11 12:25:05 | 显示全部楼层
当你老了 发表于 2019-8-9 08:16
好的 非常感谢老师我也有想过IFN-g染不出来是培养的原因,所以几个样本做对照,就是用同样的细胞,一份只 ...

你这个阳性很奇怪的,扩散的好宽,是否邻近的CD3渗漏过去?
 楼主| 发表于 2019-8-12 09:48:51 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-8-11 12:25
你这个阳性很奇怪的,扩散的好宽,是否邻近的CD3渗漏过去?

谢谢老师,我调好补偿了的,可能看起来扩散的宽是因为电压低,导致阴性细胞群挤到一块儿,所以看起来不协调的原因?
对了,差点忘记了,同样的细胞还做了质谱流式,下图是质谱流式数据,CD4和CD8都有表达IFN-g,可是流式测不粗来(泪奔)

质谱流式图

质谱流式图
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