关于细胞周期的仪器参数设定

pigdennis · 发表于 2011-7-24 17:09:15

新手，用的是BD的试剂盒，但是有几个问题，请教大家：
1.得到的FSC-SSC图细胞不在图正中，不知道该调哪个电压，怎么调？
2.FL2W－FL2A图全是细胞散点，无法gate，是不是我的细胞团聚集区在图外，怎么调
3. 实验室的protocol说柱状图FL2-A需将主峰调整到横坐标200，也不知道该怎么调

静待高人回答，最好能提供如何设置的教程或完整的protocol 感激不尽

niwanmao · 发表于 2011-7-24 20:18:25

这个试剂盒说实话，质量是不错。
1、FSC－SSC图当然调节FSC和SSC两个参数。
2、FL2-W/FL2-A如果看不见成群的细胞，那么可能就是FL2-W和FL2-A或FL2的电压，这三个参数仔细进行微调，具体多少值均是需要根据自己的细胞、机器而定，切记，微调。
3、FL2-A需将G1峰调节到200可以使G2/M期和G0/G1期的荧光强度能够达到最好的一个比例，比较有利于分析。

示例图片见这个例子下面两个点图：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=243

pigdennis · 发表于 2011-7-25 14:21:57

本帖最后由 pigdennis 于 2011-7-25 14:28 编辑

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谢谢ls，想问的具体一些，比如调FSC和SSC两个参数，如果调大了，细胞群是往哪边利用呢还有就是FL2-A需将G1峰调节到200，这个怎么调啊

niwanmao · 发表于 2011-7-25 16:38:59

pigdennis 发表于 2011-7-25 14:21

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谢谢ls，想问的具体一些，比如调FSC和SSC两个参数，如果调大了，细胞群是往哪边利用 ...

调大了当然往外面去了，例如纵坐标就是跑到上面，横坐标跑到右边。
FL2-A的调节就是调节数值啊。不要告诉我你还没有用过流式细胞仪？

pigdennis · 发表于 2011-7-25 16:57:20

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是啊小白一个啊都是照着前人留下的protocol 而且用的都是原来的设置，所以你知道怎么设

niwanmao · 发表于 2011-7-25 19:39:44

pigdennis 发表于 2011-7-25 16:57

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是啊小白一个啊都是照着前人留下的protocol 而且用的都是原来的设置，所以你知道 ...

我建议你还是找个懂的人来帮忙，流式细胞仪肯定有管理的人，请他帮忙一下、指教一下，我们在论坛里面有些东西说不清楚的。

kitemay · 发表于 2011-7-25 22:46:16

BD公司新出了几盘vcd，是关于软件使用的入门基础，我就是跟着那个视频一步步学的，做多了就知道了，可以跟公司或者代理商要，是免费的。

wmingzhen · 发表于 2011-7-26 14:19:46

对于新手，还有一点要注意：就是FSC电压的调节，如果细胞很散、不集中，或者都挤在边上，有可能你的细胞较大，建议将FSC电压调为E-1，一般默认的是E00。这样你的细胞就比较集中了，然后再调SSC电压和FSC增益值，使细胞团显示在合适的位置。
至于，FL2-A的面积峰调节在200道左右的位置，需调节P4（FL2-H）电压，我是BDFACSCalibur的机器，一般电压在402的位置。

wmingzhen · 发表于 2011-7-26 14:22:32

关于BD流式细胞仪-细胞周期及DNA分析视频请访问如下网址：http://www.mingzhen8.com/a/shipinziyuan/2011/0225/107.html

pigdennis · 发表于 2011-7-26 22:18:15

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十分感谢

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