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标题: 小鼠外周血检测MDSC如何分析 [打印本页]

作者: 小鹿 时间: 2020-5-9 09:44
标题: 小鼠外周血检测MDSC如何分析
   各位老师好，最近做一个小鼠外周血测MDSC的，原本是想免疫磁珠分选获得P-MDSC和G-MDSC，然后再流式分析LY6G和CD11b的MDSC表达。但是这边条件限制做不了分选，所以尝试着血样裂红标记LY6G和CD11b抗体直接检测。    之前浏览了大家小鼠MDSC主要标记GR-1CD11b,LY6G,LY6c,然后LY6G和CD11b在粒细胞、单核细胞都会表达，上机的时候也发现主要集中在“单核”那群细胞
   试着不同圈门分析得到以下结果，不确定哪种方式比较正确，或者我可以选中所有细胞，圈选CD11+，再看LY6G的表达情况吗？
   不知道有没有比较可行的方法不用分选，检测MDSC的？

[attach]19992[/attach][attach]19993[/attach][attach]19994[/attach][attach]19995[/attach]

作者: 小鹿 时间: 2020-5-10 16:49
EI，实验经验不足，还望各位老师指导一下哈。

作者: niwanmao 时间: 2020-5-11 08:56
2017年回答过一个小鼠MDSC的问题，供参考：https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6088-1-1.html

作者: 小鹿 时间: 2020-5-11 10:13

niwanmao 发表于 2020-5-11 08:56
2017年回答过一个小鼠MDSC的问题，供参考：https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6088-1-1.html ...

嗯嗯，谢谢老师，分析时有借鉴以上帖子，检测MDSC基础的都需要标记GR-1CD11b,LY6G,LY6c这4个吗？像我只标记LY6G和CD11b两个抗体的话来判断MDSC的是不是分群不够充分？

作者: liuruiluna 时间: 2020-5-11 16:09
做分析的话，本来也不用分选吧？直接标记抗体上机看比例么。
一般分选出来的，会拿传出来的细胞做下一步实验，比如培养了，提取蛋白或者RNA的，不了解为啥要分选之后再检测

作者: niwanmao 时间: 2020-5-11 17:54

小鹿发表于 2020-5-11 10:13
嗯嗯，谢谢老师，分析时有借鉴以上帖子，检测MDSC基础的都需要标记GR-1CD11b,LY6G,LY6c这4个吗？像我只标 ...

只有Ly6G和CD11b分不开的。

作者: 小鹿 时间: 2020-5-12 09:44

liuruiluna 发表于 2020-5-11 16:09
做分析的话，本来也不用分选吧？直接标记抗体上机看比例么。
一般分选出来的，会拿传出来的细胞做下一步实 ...

本意可能是想获取总的MDSC细胞，然后看一下其中LY6G和CD11b分群的比例。

作者: 小鹿 时间: 2020-5-12 09:47

niwanmao 发表于 2020-5-11 17:54
只有Ly6G和CD11b分不开的。

好的，了解。感谢老师解答

作者: liuruiluna 时间: 2020-5-15 14:01

小鹿发表于 2020-5-12 09:44
本意可能是想获取总的MDSC细胞，然后看一下其中LY6G和CD11b分群的比例。

这些都可以在不用分选的情况下直接流式分析出来。而且分选过程中也有丢失目标细胞的可能。我个人认为分选不是很必要

作者: 小鹿 时间: 2020-6-20 11:53

niwanmao 发表于 2020-5-11 17:54
只有Ly6G和CD11b分不开的。

老师，我这次增加了两个指标，FITC anti-mouse Ly-6G；PerCP anti-mouse Ly-6C;PE anti-mouse/human CD11b;APC anti-mouse (Gr-1),
结果出来，参照以下两种方式分析：
1.从CD11b+，GR-1那群细胞选择看LY6C/LY6G阴阳性的比例，感觉没办法区分，只有一群细胞；
2.选择从CD11+这群选择看LY6C/LY6G，就有了明显分群；但是两种分析方式感觉结果差很远昂。
这个数据文件，麻烦您帮我看看：[attach]20196[/attach]

[attach]20197[/attach]

[attach]20198[/attach]

作者: niwanmao 时间: 2020-6-22 08:59

小鹿发表于 2020-6-20 11:53
老师，我这次增加了两个指标，FITC anti-mouse Ly-6G；PerCP anti-mouse Ly-6CE anti-mouse/human ...

还算可以的，能够分出：
[attach]20200[/attach]

作者: 小鹿 时间: 2020-6-22 10:36
老师，gMDSC跟mMDSC需要分开选取P3跟R5里分析么？我当时十字画门选取了CD11b+,Gr-1+细胞，然后选择LY6G/LY6C的通道得到您“2/p3”的那个图。这个是为什么呢？而且R5那群细胞感觉不是特别明显。

作者: niwanmao 时间: 2020-6-23 12:26

小鹿发表于 2020-6-22 10:36
老师，gMDSC跟mMDSC需要分开选取P3跟R5里分析么？我当时十字画门选取了CD11b+,Gr-1+细胞，然后选择LY6G/LY6 ...

gMDSC和mMDSC性质不同，是需要P3和R5分开的。R5你放大看，其实是分群清楚的。

作者: 小鹿 时间: 2020-6-23 16:48

niwanmao 发表于 2020-6-23 12:26
gMDSC和mMDSC性质不同，是需要P3和R5分开的。R5你放大看，其实是分群清楚的。 ...

看到有文章描述MDSC标记CD11b/Gr-1也会分群差异的，那这个结果定义是这样吗？以下细胞群占PBMC比例为
1.总MDSC比值:P3+R5；
2.粒细胞MDSC:gMDSC（0.53%）*P3;
3.单核细胞MDSC:mMDSC（31.06%）*R5;

[attach]20207[/attach]

作者: niwanmao 时间: 2020-6-24 08:43

小鹿发表于 2020-6-23 16:48
看到有文章描述MDSC标记CD11b/Gr-1也会分群差异的，那这个结果定义是这样吗？以下细胞群占PBMC比例为
1.总 ...

总MDSC=gMDSC+mMDSC的比例之和
其它两个对的。

作者: 小鹿 时间: 2020-6-24 14:50

niwanmao 发表于 2020-6-24 08:43
总MDSC=gMDSC+mMDSC的比例之和
其它两个对的。

按照这个算法：总MDSC:  31.59%
                     gMDSC: 0.21%
                     mMDSC:  1.64%
老师，我感觉我的逻辑要凌乱了

；难道总MDSC不是gMDSC与mMDSC和吗？？按照我之前的表述也不对。

作者: niwanmao 时间: 2020-6-25 09:19

小鹿发表于 2020-6-24 14:50
按照这个算法：总MDSC:  31.59%
                     gMDSC: 0.21%
                     mMDSC: ...

晕。我不知道你是怎么理解的。
我前面这个意思就是总MDSC=gMDSC+mMDSC=0.21+1.64=1.85％

作者: 小鹿 时间: 2020-6-26 08:58

niwanmao 发表于 2020-6-25 09:19
晕。我不知道你是怎么理解的。
我前面这个意思就是总MDSC=gMDSC+mMDSC=0.21+1.64=1.85％ ...

奥奥，理解错了，

我以为是说圈门那部分相加，谢谢老师解答。

作者: 345641775 时间: 2020-6-30 14:11

niwanmao 发表于 2020-6-25 09:19
晕。我不知道你是怎么理解的。
我前面这个意思就是总MDSC=gMDSC+mMDSC=0.21+1.64=1.85％ ...

老师，圈门时我划的那些细胞可以也圈进去吗？这一堆细胞是什么细胞呢？

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