细胞周期ModFit分析

niwanmao

stef1981 发表于 2012-3-23 09:03

                               
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R1的圈法是对的，R2不对，应该排除聚集细胞，参数应该用FL2W-FL2A

正解，也可以用斜向的平行四边形，最关键是只圈左边那堆。

vetzcm的这个W/A图虽然分群不太清楚，但还是可以圈出左边那堆的，例如第一个图R2旁边的绿色和蓝色、黄色这个竖向的矩形分布。

niwanmao

vetzcm 发表于 2012-03-23 18:30:50

                               
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[quote]stef1981 发表于 2012-3-23 09:03 [url=forum.php?mod=redirect&go

是的，标记名称无所谓的。

niwanmao

vetzcm 发表于 2012-03-23 18:39:30

                               
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[quote]niwanmao 发表于 2012-3-23 09:12 [url=forum.php?mod=redirect&go

我感觉乙醇固定这一步的手法比较重要，边滴边震荡，可以是把细胞滴到乙醇，也可以把乙醇滴到细胞悬液。你可以试试哪种对你更适合。

niwanmao

ddn111 发表于 2012-3-26 22:04

                               
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看你的图中，Ｇ２/Ｇ１用2.0有点不合适，拟合不好的话ＲＣＳ比较高！

嗯，这是个问题，3.1版g2/g1设置好比例之后会严格按照该比例分析，的确会影响rcs值。不过在旧版设置效果不明显，不知道vetzcm用的是那个版本？
a/w图的门也很重要。

niwanmao

vetzcm 发表于 2012-3-26 22:53

                               
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我用的3.2版本的...

3.2是可以设置G2/G1比例，并且拟合时严格根据该比例进行拟合。

niwanmao

vetzcm 发表于 2012-3-27 22:51

                               
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是不是在分析时，我们不能过于关注G2/G1值越接近2.0越好，应根据Diagnostics 的那6个参数来评价结果的可 ...

其实我觉得在取的时候就得注意，尽可能使G2峰和G1峰的比值接近2，这样分析的时候可以省去改动这些默认值了。

取的时候尽可能使该比值接近2，我认为对一些异倍体峰的判断也更有帮助。供参考.

niwanmao

蓝白小熊 发表于 2012-4-2 10:57

                               
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周期一般不是要30000个细胞吗，这样才比较准备吧

20000个比较利于分析，当然，越多越好，但时间耗不起。

niwanmao

蓝白小熊 发表于 2012-4-3 12:49

                               
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啊，为什么呢？收集细胞不是很快么

做周期，最好的获取速度是低速。

niwanmao

蓝白小熊 发表于 2012-4-5 19:01

                               
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老师，那你的意思是，细胞数并不重要，只要一直保持低速状态就行了，对么？ ...

细胞数也重要，因为modfit等软件周期拟合时还是需要10000个以上的有效细胞。
所以以低速获取总数20000个以上的细胞，排除碎片或死细胞之后，基本上能够得到10000个有效细胞。

niwanmao

蓝白小熊 发表于 2012-4-6 08:17

                               
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我也有这种感觉，而且像293，MCF-7等细胞也是分群不清楚，难道不同的细胞在流式上都有不同的分群效果，与 ...

做细胞周期比较重要的一点就是尽量形成单细胞悬液，减少粘连细胞出现。不过粘连细胞是可以通过FL2-A/FL2-W图进行排除的，分群是否清楚应该说与消化关系不大。