FITC单染补偿？火箭峰是什么？

niwanmao

首先要说的是，贴壁细胞确实不适合做ANNEXIN V，基本上做不出好结果。可以考虑做细胞周期。

1、不是补偿值不够，而是非特异性染色太厉害，可以再适当调高FITC的电压。
2、火箭峰多指位于对角线的非特异性染色，一般是由细胞活力差导致，补偿不正确的类似火箭峰但是可以通过补偿调下去，而死细胞导致的补偿调得再高也很难下去。
3、ANNEXIN V-PI测凋亡只需用散点图分析即可，不要用直方图，你这几个散点图分群都还可以，但是细胞死的太多。

niwanmao

椴树 发表于 2013-5-7 21:34

                               
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谢谢老师 就是说 其实 我每个图里 都是有火箭峰的，细胞活力差导致的非特异染色？是指细胞死了之后相对活 ...

你想多了，呵呵。


建议参考一下这个帖子：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2156-1-1.html

niwanmao

haven_t 发表于 2013-5-7 23:07

                               
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可能对于非特异性染色的概念大家都不一样，我个人觉得成为非特异荧光可能恰当一点，因为blank里面也会出 ...

你说的是其中一种情况，另外还有一种由于细胞状态差或死亡，导致结合无特异性，那种情况所有通道的荧光均可结合，我碰到几次。

niwanmao

haven_t 发表于 2013-5-9 11:04

                               
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我所说的自然状态是指没有任何外界荧光染料下的状态。
我没有否定样品中存在死亡的细胞，如果仅仅用死亡 ...

这样的讨论非常好。

确实，象这种没染任何染料就出现的非特异性自发荧光多数都是由于NADPH或黄素蛋白引起，488nm激发，但是细胞经过物理或化学处理、细胞老化等状态都会导致这些自发荧光增高，原因不详，估计总是跟这些胞膜或胞内成份改变有关吧。

niwanmao

ddn111 发表于 2013-5-9 11:17

                               
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关于空白群有时出现斜向上的现象我对楼上的分析比较认同，碎片引起的火箭峰是另一回事。
现在疑惑的是，荧 ...

似乎也只能这样解释了  @samly0    @haven_t     

niwanmao

cn981 发表于 2015-6-11 23:31
我是新人，也是有疑问，刚看到这个帖子，和我的现象一样，总是解决不了，借老帖子再次请教一下论坛里的老师 ...

用live/dead染料去掉死细胞，多数情况下可改善明显。

niwanmao

cn981 发表于 2015-6-13 09:51
倪老师的意思是，火箭峰是死细胞太多引起的吗？是死细胞对两种染料都能结合的缘故？这种现象和仪器太久没 ...

和仪器校正没有关系，和标本本身有关。