PMA离子霉素刺激、表染CD19、固定破膜后，CD19测不出来？

niwanmao

从FSC/SSC的分布看，细胞都碎了。
建议先用样本，在固定破膜步骤上进行好好摸索保证细胞完整的条件，条件摸索熟练了，再做实验样本。

niwanmao

面团胖宝宝 发表于 2022-11-22 20:54
请问楼主最后如何解决的呢？我最近做破膜也是这样，全是细胞碎片

首先，样本质量要保证状态较好。
其次，固定这一步比较重要。
最后，破膜剂的浓度也很关键。

niwanmao

面团胖宝宝 发表于 2022-11-23 11:11
我是用的BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation/Permeabilization Kit进行破膜，具体操作步骤如下，都是按着说 ...

看来是后来的样本本身或者处理上出了什么细节问题。
破膜剂应该是问题不大。

niwanmao

面团胖宝宝 发表于 2022-11-23 15:57
处理步骤都是一样的，老师您觉得固定破膜液从250改为200ul或者破膜时间由20min改为15min能有帮助吗？ ...

如果个别样本出了问题，一般都是细节上的问题，建议不要轻易修改步骤中的任何体系，而是仔细回顾一下各个步骤操作的细节。