抗体孵育时间及温度对结果的影响

pushiming77

我觉得还是按Kit上来吧，我一般孵育是4℃、30min，没有出现什么问题。在磁珠分选的时候，我用过过长的时间孵育抗体，导致比较多的非特异接合，想必流式的抗体染色也是一样；还是常温下染色对细胞本来就伤害比较大，这样会造成更多的死细胞，细胞的自发萤火要强于活细胞，这也就增殖阳性率。
生产厂家的Kit说明都是经过很多实验得来的最佳方案，我们一般不以更改。

pushiming77

刘星宇 发表于 2013-9-13 11:40

                               
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“还有常温下染色对细胞本来就伤害比较大，这样会造成更多的死细胞”。
但很多临床标本都是在常温下处理 ...

一些资料显示，细胞在PBS里，4℃可以存活10h，在常温下只能存活4h，所以细胞提取实验，我们大多在冰上操作。