流式估测DNA含量的技术问题

guan · 发表于 2016-9-7 10:00:38

我在用FlowSight估测真菌孢子的DNA含量时，用70%乙醇过夜固定后，用PI染色30min 后发现孢子的整个细胞质部分也染上色发出黄荧光，PI不是细胞核染液吗？为何会出现这种情况呢，是否PI染色后进行脱色处理更好？另外我的阴性对照组也发现核染色发出荧光，是否是生物的自发荧光现象呢？还是和我的阴性对照组固定了有关？

阴性对照组

阴性对照组

细胞质荧光过重

实验组细胞质部分荧光强

guan · 发表于 2016-9-9 08:03:39

倪老师，我在加PI之前用RNAse A 37℃水浴了1h，应该将RNA除尽了，阴性对照组是否不需固定。

guan · 发表于 2016-9-9 16:58:39

是不是将RNAse A和PI配在一起效果比较好，另外样品固定时加入-20℃预冷的乙醇后原因是什么呢置于4℃固定24小时，为什么乙醇要低温固定呢？另外用PI染色时常温还是4℃效果好呢？原因是什么呢？

guan · 发表于 2016-9-13 06:50:24

倪老师，PI染色后是否进行脱色处理后，减弱本底荧光，使样品成像的图片更加的好呢？另外脱色的话有什么好的方法推荐呢？

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