一个同型对照选择的问题

gcz5340

今天被人问了一个关于同型对照选择的问题，自己还真没考虑过，跟大家探讨一下。比如eB抗体：

Anti-Mouse/Rat IL-17A APC
host为Rat，Rat anti-Rat感觉很怪，如果该抗体用于检测Rat IL-17A，同型对照选什么，还是Rat IgG2a Isotype?

niwanmao

从说明书和文献来看，应该是ANTI-MOUSE的，来源是RAT IgG2a，kappa，所以同型对照可以选择eBioscience公司的Rat IgG2a K Isotype Control APC：http://www.ebioscience.com/media/pdf/tds/17/17-4321.pdf

haven_t

听过两个老外的讲座都说不建议用同型对照，但一直听不清楚是什么原因，大家讨论一下。

niwanmao

haven_t 发表于 2013-8-12 16:26

                               
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听过两个老外的讲座都说不建议用同型对照，但一直听不清楚是什么原因，大家讨论一下。 ...

我估计他们的意思是用FMO对照，就没必要再用同型对照。这个观点我也基本赞同。
但是现在遇到好多都是只做单标的，此时，我觉得还是需要用同型对照的。

关于FMO和同型对照：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2358-1-1.html

haven_t

niwanmao 发表于 2013-8-12 16:43

                               
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我估计他们的意思是用FMO对照，就没必要再用同型对照。这个观点我也基本赞同。
但是现在遇到好多都是只做 ...

FMO 减去的那个加不加同型抗体呢？

niwanmao

haven_t 发表于 2013-8-12 16:45

                               
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FMO 减去的那个加不加同型抗体呢？

不加同型对照的，参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/reade ... Mkux3E6HBLT7rbDGPII 第31页。

haven_t

niwanmao 发表于 2013-8-12 16:56

                               
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不加同型对照的，参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/reade ... Mkux3E6HBLT7rbDGPII 第31页。 ...

为什么不加呢？我觉得加了不是更好。

haven_t

niwanmao 发表于 2013-8-12 16:43

                               
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我估计他们的意思是用FMO对照，就没必要再用同型对照。这个观点我也基本赞同。
但是现在遇到好多都是只做 ...

其实从某种层面来说我们一早就在做FMO了。在我们做单色标记的时候，用1种颜色，这时候减去1就是0，也就是空白管。当我们做双色标记时，2-1=1，这个就是我们的两支补偿单标管。所以我们这时做的就是FMO。

gcz5340

niwanmao 发表于 2013-8-12 16:22

                               
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从说明书和文献来看，应该是ANTI-MOUSE的，来源是RAT IgG2a，kappa，所以同型对照可以选择eBioscience公司 ...

单克隆抗体制备第一步就是抗原免疫动物，产生相关的B淋巴细胞克隆，但是Rat的IL-17(既然同源性高，应该表位和mouse一样)抗原肽怎么能刺激Rat产生免疫反应呢，这点有点不好理解。

gcz5340

haven_t 发表于 2013-8-12 16:26

                               
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听过两个老外的讲座都说不建议用同型对照，但一直听不清楚是什么原因，大家讨论一下。 ...

我也不太喜欢同型对照，最好是阴阳性分的很开，如果是连续表达最好比较实验组和对照组的荧光强度，很难准确定量的。

我觉得抗体的制备和单克隆抗体的制备虽然步骤差不多，但是什么淋巴瘤的融合率、抗体的效价、纯化的效率肯定还是有很多不同，所以同型对照还是不能严谨的作为流式试验的阴性对照，非特异性染色可能还是有差异。

个人意见，希望不要误导大家。