一个同型对照选择的问题

haven_t

刘星宇 发表于 2013-8-16 10:15

                               
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haven_t老师好，我做人血标本实验，检测胞膜受体表达，抗体说明书推荐的Fc受体阻断剂是人IgG（没有荧光素 ...

我只是觉得有点奇怪，既然是人血标本，血中不是有大量人的IgG吗？当然加进去应该也没什么影响。
理论上来说，作为对照除了荧光抗体外，所有试剂和操作都应该平行的才有可比性。所以我觉得要不都加，要不都不加。

看看 @niwanmao 和 @gcz5340 的意见吧。

niwanmao

刘星宇 发表于 2013-8-16 10:15

                               
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haven_t老师好，我做人血标本实验，检测胞膜受体表达，抗体说明书推荐的Fc受体阻断剂是人IgG（没有荧光素 ...

你做人外周血标本，一般是不需要的。

如果非要用，应该有专门的商品化Fc Blocking reagent，或者用灭活的人血清（http://cyto.mednet.ucla.edu/Prot ... 20FC%20receptor.htm）

刘星宇

haven_t 发表于 2013-8-16 11:20

                               
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我只是觉得有点奇怪，既然是人血标本，血中不是有大量人的IgG吗？当然加进去应该也没什么影响。
理论上来 ...

谢谢haven_t老师，原先我并没有加    人IgG去阻断Fc受体，后来出现过同型对照组背景不干净（很难设门，我不知道有没有背景不干净之说），boss要求按照说明书操作，所以在同型对照管和检测管都加了IgG。最近全血标本是经过培养了的，出现了其他问题，一个工程师就说是加人IgG所致，说我们方法出现了严重问题，不应该在检测管也加IgG（他意思是IgG 跟同型对照IgG2B-PE是一样的）…… 但这两天的实验也不加IgG了，同型对照设门也挺好的了。

刘星宇

niwanmao 发表于 2013-8-16 15:26

                               
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你做人外周血标本，一般是不需要的。

如果非要用，应该有专门的商品化Fc Blocking reagent，或者用灭活 ...

倪老师好，试剂说明书推荐的Fc Blocking reagent就是 人IgG，我也看到了资料或者选用灭活人血清，我现在知道了对于培养的单种细胞是应该加Fc受体阻断剂。我前面的帖子主要是想证实：对于同型对照管和检测管要么都不加Fc阻断剂，要么都得加，这样的操作才是正确的。
现在弄明白了。
（还是专业的网站能学到正确的知识啊）

niwanmao

刘星宇 发表于 2013-8-16 23:58

                               
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倪老师好，试剂说明书推荐的Fc Blocking reagent就是 人IgG，我也看到了资料或者选用灭活人血清，我现在 ...

应该是单核细胞吧。单核细胞表面的CD16就是一种Fc受体（FcγRIII），所以非特异性染色较明显（例如我们临床中碰到的CD61等）。
说明书所说的人IgG其实不是指我们平时用的IgG抗体，而是人血清中提取的G种免疫球蛋白，浓度需在4mg/ml。所以用血清是最好的。

刘星宇

niwanmao 发表于 2013-8-17 20:41

                               
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应该是单核细胞吧。单核细胞表面的CD16就是一种Fc受体（FcγRIII），所以非特异性染色较明显（例如我们临 ...

人IgG与IgG抗体不一样，这我知道的，我们说明书推荐对于培养的某种细胞加 IgG 1μg/10⁵细胞。我们是培养全血，现在也不加人IgG，没有必要。