健康人外周血B细胞检测出现CD3+CD19+的群体

maomao

niwanmao 发表于 2025-6-13 09:02
这两个荧光素搭配以前在其它抗体上有没有搭配用过？

只看图形，感觉应该是可以调过去，但是Spreading  E ...

荧光补偿是调不过去的，这个实验以前就做过的，没有问题，就近期出现这个问题，实在是找不到原因，所以来请教大咖们

maomao

Yuck 发表于 2025-6-13 08:50
去上清了那应该也不是这个原因。那得从新梳理找找了。发完整流程吧。仪器、样品来源、操作流程。 ...

其实上面我把信息都写的比较全了，再细一些吧：健康人的外周全血，检测B细胞，取200ul全血到5ml流式管，加入1×RBC裂解液（BD 555899）室温避光裂解15min，确认液体呈透亮色，4℃ 200g 5min离心去上清，再加1ml 1×DPBS洗涤一次，离心去上清，加100ul重悬，加入滴定好量的抗体，室温避光孵育15min，加入1ml 1×DPBS离心去上清，再洗涤一遍，最后300ul重悬上机，仪器是BD FACSCanto II PLUS(3激光10色）

tiger

maomao 发表于 2025-6-13 11:03
其实上面我把信息都写的比较全了，再细一些吧：健康人的外周全血，检测B细胞，取200ul全血到5ml流式管， ...

换一个CD3的克隆号试试

niwanmao

maomao 发表于 2025-6-13 10:53
荧光补偿是调不过去的，这个实验以前就做过的，没有问题，就近期出现这个问题，实在是找不到原因，所以来 ...

做一下CD19和CD3的单染，看看扩散如何