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楼主: liqiong

[标本处理] jc-1设阳性对照做什么用,需要设门么?

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发表于 2016-3-2 21:10:58 | 显示全部楼层
liqiong 发表于 2016-3-2 21:09
老师,我想问做流式的时候需要细胞计数么,这个细胞的数量对结果影响大么?
...

数量影响不大。
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发表于 2016-3-2 21:12:02 | 显示全部楼层
liqiong 发表于 2016-3-2 21:06
我忘记采集cccp组的数据了

CCCP组和DMSO组应该放在一起看才能对比的出来设门界限。
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 楼主| 发表于 2016-3-2 21:13:28 | 显示全部楼层
这是那几幅图的原始数据,您看看

0.1%DMSO

0.1%DMSO

低剂量组

低剂量组

中剂量组

中剂量组

高剂量组

高剂量组
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发表于 2016-3-6 21:25:53 | 显示全部楼层
感觉是补偿有问题。
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 楼主| 发表于 2016-3-18 16:57:46 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-3-2 21:12
CCCP组和DMSO组应该放在一起看才能对比的出来设门界限。

老师,我现在最大的问题是不会用cccp设门,先用正常细胞调参数怎样才算调好,cccp上流式时还要调参数么?还是用cccp只设门
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发表于 2016-3-18 20:09:55 | 显示全部楼层
liqiong 发表于 2016-3-18 16:57
老师,我现在最大的问题是不会用cccp设门,先用正常细胞调参数怎样才算调好,cccp上流式时还要调参数么? ...

主要的标准就是将CCCP处理过的阳性对照调整到FL1强、FL2低的位置,在条件不变的情况下,看正常细胞(阴性对照)的位置应该在FL1弱而FL2强的位置。这就对了。
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 楼主| 发表于 2016-3-19 10:25:58 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-3-18 20:09
主要的标准就是将CCCP处理过的阳性对照调整到FL1强、FL2低的位置,在条件不变的情况下,看正常细胞(阴性 ...

那在设门的时候设十字门还是矩形门?
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发表于 2016-3-19 21:13:57 | 显示全部楼层
liqiong 发表于 2016-3-19 10:25
那在设门的时候设十字门还是矩形门?

不规则形门。
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 楼主| 发表于 2016-3-20 23:23:47 | 显示全部楼层

老师这是我今天做的实验,我还是不会用cccp调节荧光补偿,不知道怎样才算将正常对照组与cccp组调开,cccp组上机以后是往图的左下方走而不是右下方,而且cccp组调节荧光补偿后,以前正常对照也会往调节的方向偏移,这不是就偏离原来的位置了么,那开始用正常对照组调节意义何在?
那以下是我的上机步骤
1、用胰酶消化(0.25%)
2、用原培养基终止消化
3、收集细胞,离心
4、吸去原培养基,加PBS清洗
5、离心
6、每管加staining buffer(37℃温热)
7、阳性对照加cccp 1μl,JC-1 1μl处理5min
8、其他组加JC-1 1μl 37℃避光孵育15-30min
9、离心,弃去staining buffer
10、加1mlPBS清洗,离心,吸出PBS
11、加新的PBS重悬,上机
12、用正常对照上机,将FL1荧光调节102(2为上角标)处,FL2调节到102——103处,将cccp上机,
求老师能给我一个正常对照调节图、cccp调节图、cccp调节以后的的图,我还不能明白画门的意义,不是用红/绿那个算数平均值比一下就好了么?






0.png

cccp

cccp

低剂量组

低剂量组

中剂量组

中剂量组

高剂量组

高剂量组
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