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发表于 2016-3-20 23:23:47
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老师这是我今天做的实验,我还是不会用cccp调节荧光补偿,不知道怎样才算将正常对照组与cccp组调开,cccp组上机以后是往图的左下方走而不是右下方,而且cccp组调节荧光补偿后,以前正常对照也会往调节的方向偏移,这不是就偏离原来的位置了么,那开始用正常对照组调节意义何在?
那以下是我的上机步骤
1、用胰酶消化(0.25%)
2、用原培养基终止消化
3、收集细胞,离心
4、吸去原培养基,加PBS清洗
5、离心
6、每管加staining buffer(37℃温热)
7、阳性对照加cccp 1μl,JC-1 1μl处理5min
8、其他组加JC-1 1μl 37℃避光孵育15-30min
9、离心,弃去staining buffer
10、加1mlPBS清洗,离心,吸出PBS
11、加新的PBS重悬,上机
12、用正常对照上机,将FL1荧光调节102(2为上角标)处,FL2调节到102——103处,将cccp上机,
求老师能给我一个正常对照调节图、cccp调节图、cccp调节以后的的图,我还不能明白画门的意义,不是用红/绿那个算数平均值比一下就好了么?
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