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楼主: ghost2r

有关标记Treg的FOXP3破膜是否过夜的问题

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发表于 2011-6-13 10:40:39 | 显示全部楼层
我做的是小鼠的Treg,一直用的方法是标记抗体之前应用FcR受体阻断剂阻断,表面标记抗体标记完细胞固定,破膜剂用的是皂素,皂素打孔是瞬时的,所以Foxp3标记时是与破膜剂共孵育的,1小时左右,效果不错。抗体用的是ebioscience的,细胞也没刺激过。经验仅供参考,希望有帮助。
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发表于 2011-10-27 17:11:36 | 显示全部楼层
回复 jus_immo 的帖子

这个太神奇了,这不就断了公司的财路了?不知道是否可靠?
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发表于 2021-2-23 09:37:51 | 显示全部楼层
sugarswallow 发表于 2011-3-20 10:32
估计如果是FOXP3,还是EBIOSCIENCE公司的用得多些,这个时候可以参照sakaguchi(发现Treg细胞的日本人)组发 ...

想请教一下各位老师,我想同时检测人的Th1、Th2、Th17、Treg,需要检测哪些指标呢?第一次做没有经验,还想请教一下做过的老师们哪些厂家的抗体好用呢?
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发表于 2021-2-23 10:46:31 | 显示全部楼层
汀雅 发表于 2021-2-23 09:37
想请教一下各位老师,我想同时检测人的Th1、Th2、Th17、Treg,需要检测哪些指标呢?第一次做没有经验,还 ...

已在你的提问帖回答:
Th1、Th2、Th17、Treg胞内因子检测方案
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8931-1-1.html
(出处: 流式中文网)
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发表于 2023-9-5 18:48:00 | 显示全部楼层
jus_immo 发表于 2011-6-13 10:40
我做的是小鼠的Treg,一直用的方法是标记抗体之前应用FcR受体阻断剂阻断,表面标记抗体标记完细胞固定,破 ...

请问是与固定/破膜剂(fixation/permeabilization)共孵育还是破膜缓冲液(permeabilization buffer)呀?
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发表于 2023-9-5 21:24:43 | 显示全部楼层
wzw_iris 发表于 2023-9-5 18:48
请问是与固定/破膜剂(fixation/permeabilization)共孵育还是破膜缓冲液(permeabilization buffer)呀 ...

样本先固定过。后面洗涤后,再与破膜剂(jus_immo 站友用的是比较温和的皂素)共孵育 。
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发表于 2023-9-5 22:23:19 | 显示全部楼层
我做Treg流式的经验:抗体与破膜液的品牌最好是一样的(试过不同来源的,Foxp3的分群非常弱,换成同样品牌的后分群就非常明显)。另外,可以4℃过夜固定,和固定30min的区别不大(但肯定是固定30min最保险)。
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发表于 2023-9-6 10:41:28 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-9-5 21:24
样本先固定过。后面洗涤后,再与破膜剂(jus_immo 站友用的是比较温和的皂素)共孵育 。 ...

好的谢谢
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