细胞样品的固定问题

ziniu9572

liuruiluna 发表于 2022-4-1 15:34
固定只会让GFP更受影响，是GFP吗？ 你看看这个信息对你有点帮助没，：用抗GFP抗体，对解离后的样本进行标记 ...

不是，我的样本偶联的荧光蛋白是这个https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12819206/，和GFP的同一性只有5.7%，估计用不上，感谢啊这位站友

ziniu9572

liuruiluna 发表于 2022-4-1 15:34
固定只会让GFP更受影响，是GFP吗？ 你看看这个信息对你有点帮助没，：用抗GFP抗体，对解离后的样本进行标记 ...

我的不是，是mAG,这个https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12819206/，和GFP类似但是同一性只有5.7%

niwanmao

ziniu9572 发表于 2022-4-1 22:00
我的不是，是mAG,这个https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12819206/，和GFP类似但是同一性只有5.7% ...

不管结构是否类似，其实都有必要探索一下，流式处理步骤中是否有影响其荧光的因素。

所以我前面其实是想让你说一下流式处理步骤，你前面只写了细胞解离的步骤。在流式上机之前，没有进行过其它处理吗？

ziniu9572

niwanmao 发表于 2022-4-2 07:57
不管结构是否类似，其实都有必要探索一下，流式处理步骤中是否有影响其荧光的因素。

所以我前面其实是想 ...

上机前就只加了DAPI,没有其他处理了

ziniu9572

ziniu9572 发表于 2022-4-2 12:44
上机前就只加了DAPI,没有其他处理了

之前是有做染色的，还是间标的抗体，孵育的时间很长还要多次离心，我怀疑这一步出问题所以后面就不染色直接上机