树鼩外周血淋巴细胞分两群

陈信宏的小可爱

各位老师大家好，树鼩外周血FSC&SSC图，淋巴细胞之前都是一群，这两次做的有时会分两群，有时还是比较集中。具体变化：这两次我染了FVS 780死活染料，缓冲液由PBS（自配）换成含1%BSA的PBS（自配），仪器和其他流程无变化，使用的一直是索莱宝的红细胞裂解液（R1010）
问题：什么原因导致分成两群？两群都圈起来分析是否有什么影响？

niwanmao

分成两群的，一般是操作时细胞凋亡的缘故，FVS染料分群如何？
PS：每个图上面的碎片都太多了，建议提高FSC的阈值。

陈信宏的小可爱

niwanmao 发表于 2021-11-25 09:18
分成两群的，一般是操作时细胞凋亡的缘故，FVS染料分群如何？
PS：每个图上面的碎片都太多了，建议提高FSC ...

1和2是同次处理的
3和4是上次处理的，过程中确实出现因样品太多裂解有时间差的问题

niwanmao

陈信宏的小可爱 发表于 2021-11-25 15:53
1和2是同次处理的
3和4是上次处理的，过程中确实出现因样品太多裂解有时间差的问题 ...

掌握好裂解时间，并且操作轻柔一些，问题就不会太大。

陈信宏的小可爱

niwanmao 发表于 2021-11-25 16:58
掌握好裂解时间，并且操作轻柔一些，问题就不会太大。

谢谢倪老师，请问这样分了两群的淋巴细胞能都圈起来分析吗？（或者说这样的样本还能正常分析吗）

陈信宏的小可爱

niwanmao 发表于 2021-11-25 16:58
掌握好裂解时间，并且操作轻柔一些，问题就不会太大。

谢谢倪老师，请问这样分了两群的淋巴细胞能都圈起来分析吗？（或者说这样的样本还能正常分析吗）

niwanmao

陈信宏的小可爱 发表于 2021-11-25 17:29
谢谢倪老师，请问这样分了两群的淋巴细胞能都圈起来分析吗？（或者说这样的样本还能正常分析吗）
...

可以分析。

陈信宏的小可爱

niwanmao 发表于 2021-11-25 20:07
可以分析。

谢谢倪老师的指导