绝对计数

特别懒的小豹子

niwanmao 发表于 2022-1-3 14:15
一般绝对计数，大多是免洗为主。
真避免不了洗涤，我个人倾向于上机前加，因为这样至少可保证微球数是准 ...

老师你看这篇文献中：题目-Monitoring lymphocyte proliferation in vitro
and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester-有提到：Beads should be added before any antibody staining procedures, so that any loss in cells during sample preparation will be accompanied by a proportional loss of beads.

niwanmao

特别懒的小豹子 发表于 2022-1-3 18:57
谢谢老师回复，我再确定下，如果使用瓶装的微球，说明书上写这个微球 are excited by a variety of laser ...

那么你用的应该不是绝对计数微球，请确认微球的产品名称和用途。

另外一个问题同时回答，文献中如何做，我不做评价，我个人倾向于前面说的。

特别懒的小豹子

niwanmao 发表于 2022-1-3 19:43
那么你用的应该不是绝对计数微球，请确认微球的产品名称和用途。

另外一个问题同时回答，文献中如何做， ...

谢谢老师回复，我看了下试剂网站说明，确实是biolegend的计数微球，Precision Count Beads™ are designed for counting the absolute number of cells in a complex mix population and other particles by flow cytometry. Precision Count Beads™ are excited by a variety of lasers including violet (405nm), blue (488nm), yellow/green (562nm), and red (633nm）。按照您最早的回复，建议的workflow是不是应该这样：1.从孔板吸取全部细胞转移至流式管 离心去上清 重悬 2. 流式染色 3.洗去游离抗体，100ulPBS重悬细胞 4.加入100ul混匀的beads（说明书推荐每个样本100ul） 5.流式上机 6.根据流式收取的cells counts 和 beads counts，已知微球密度，所以能计算出细胞悬液的密度，再乘以原先孔板的细胞悬液体积，即为原先孔板中细胞的绝对数量

niwanmao

特别懒的小豹子 发表于 2022-1-3 20:06
谢谢老师回复，我看了下试剂网站说明，确实是biolegend的计数微球，Precision Count Beads™ are designe ...

建议尽量避免第3步，你可以先比对去掉第3步，对你们的结果是否有影响？如果无影响，则去掉第3步。

hannotech

计数在使用前，一定要多摇一下。另外，微球如果长时间和细胞混在一起，也可以被吞噬。