请教：关于CD11b和F4/80检测小鼠巨噬细胞

niwanmao

bailiping 发表于 2022-8-1 21:46
我在做预实验的时候，没有固定，直接用1毫升0.2% Triton-X100，破膜10 min 没有收到细胞，是我破膜剂的浓 ...

不固定当然不行。只要把细胞膜固定了，再破膜打孔，这个膜才不会破碎。

bailiping

niwanmao 发表于 2022-8-2 08:36
不固定当然不行。只要把细胞膜固定了，再破膜打孔，这个膜才不会破碎。 ...

好的，谢谢老师

Climber

老帖子了 补充一下吧，小鼠不同器官的巨噬细胞的分型方案差别很大，这个图是B6小鼠脾脏的巨噬细胞，其中CD11bint F4-80high 为红髓巨噬细胞，CD11b high F4-80 int为边缘区巨噬细胞

niwanmao

Climber 发表于 2022-8-2 17:31
老帖子了 补充一下吧，小鼠不同器官的巨噬细胞的分型方案差别很大，这个图是B6小鼠脾脏的巨噬细胞，其中CD1 ...

谢谢分享，可有图示？

Climber

niwanmao 发表于 2022-8-2 18:12
谢谢分享，可有图示？

我找了下自己做的没找到，所以引用文献上的吧，脾脏的巨噬按解剖结构是可以分为红髓、边缘区、白髓的巨噬细胞的，其实CD11b F4-80染出来大多数都是这种效果，不过大家关注的都是红髓的巨噬细胞，殊不知边缘区的巨噬细胞还可以分为MMM和MZM，根据我阅读的一些文献可以根据Tim4来进一步分群，但是Tim4+的是MZM，但Tim4-的并不全是MMM，个人怀疑里面Tim4-的应该还有白髓的巨噬细胞，但是目前还没有能够分出白髓巨噬的方案。大家有兴趣的话可以看看Identification and isolation of splenic tissue-resident
macrophage sub-populations by flow cytometry和F4/80 as a Major Macrophage Marker: The Case of the Peritoneum and Spleen

Climber

另外再补一张图

只为你一个人

bailiping 发表于 2022-8-1 21:46
我在做预实验的时候，没有固定，直接用1毫升0.2% Triton-X100，破膜10 min 没有收到细胞，是我破膜剂的浓 ...

我觉得时间可能有点短，可以适当提高破膜时间。

25185006

bailiping 发表于 2022-8-1 21:46
我在做预实验的时候，没有固定，直接用1毫升0.2% Triton-X100，破膜10 min 没有收到细胞，是我破膜剂的浓 ...

你随便问个试剂商都知道了。。。。。还用Triton。。。。。？？？？？

wmj123456

请问用RAW264.7巨噬细胞检测F4/细胞，没有极化，只染了F4/80,阳性的比例大概在多少？我查的多是极化后的，希望有经验的老师分享下经验，谢谢。

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-2-25 13:12
请问用RAW264.7巨噬细胞检测F4/细胞，没有极化，只染了F4/80,阳性的比例大概在多少？我查的多是极化后的， ...

一般静息状态，未被诱导至巨噬细胞，应该是很低的，参见：《RAW 264.7 Macrophage Polarization by Pancreatic Cancer Cells – A Model for Studying Tumour-promoting Macrophages》：


另外，一定要注意，RAW264.7细胞株在30代之后就不能再用了，稳定性不行（Evaluation of phenotypic and functional stability of RAW 264.7 cell line through serial passages）