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[结构和原理] 小鼠脂肪组织巨噬细胞分析、设门

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 楼主| 发表于 2021-12-9 14:41:07 | 显示全部楼层 |阅读模式
5流星
小鼠脂肪组织流式,胶原酶消化后,染色,上机。第一次分析(见第一次分析图),发现CD206可以分成3群细胞,并且信号最高的CD206+群都压边了,检查补偿(见补偿图),觉得没问题。

第二次分析(见第二次分析图),调整了去黏连设门的范围,发现这群CD206+信号很高的群少了很多,但是仍然有3群CD206细胞。
第三次分析(见第三次分析图),在FSC-SSC中减小设门范围,感觉CD206分群比较接近正常。
请问这样的调整合理吗?设门是否有问题?
谢谢!!!

第一次分析

第一次分析
1638969073(1).jpg
1638969093(1).jpg

补偿

补偿
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 楼主| 发表于 2021-12-10 23:39:57 | 显示全部楼层
这一群似乎是粒细胞?应该去除吧,感觉最后设门没问题
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发表于 2021-12-12 09:50:40 | 显示全部楼层
设门上看,第3次设门是可以的,之前的FSC大、CD206极高的,应该 是中性粒,但CD206可能并非真阳,而是非特异性假阳。可检查一下邻近通道补偿。

至于补偿矩阵,我对flowjo的补偿调节一直没有好感,就是因为从来不把CD分子和荧光素一起写在上面,很难从逻辑上去判断是否调节准确。从图形上看,感觉有些分子应该是存在过度补偿,但由于看不清荧光素 ,并且没有CD分子以及不同细胞群的颜色显示,故无法准确判断。
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 楼主| 发表于 2021-12-16 14:41:55 | 显示全部楼层
本帖最后由 请叫我黄总 于 2021-12-16 14:47 编辑
niwanmao 发表于 2021-12-12 09:50
设门上看,第3次设门是可以的,之前的FSC大、CD206极高的,应该 是中性粒,但CD206可能并非真阳,而是非特 ...

倪老师,我重新发一下我的补偿矩阵。其实我一直有个疑问,用微球做单染管,调补偿的时候,单染管达到横平竖直了,样品管却可能存在补偿过渡或不足,这时再以样品管为标准重新调补偿,那单染管的意义何在?到底以谁为标准?
另外,我把Flowjo的ACS文件上传到百度网盘了,您有空再帮忙看看,谢谢!

链接:https://pan.baidu.com/s/1Jh8LjU79YccgNuzvtnTsgA
提取码:0000



图片12.png

补偿矩阵

补偿矩阵
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发表于 2022-8-5 11:48:00 | 显示全部楼层
文件失效了,再发一下,我来帮你处理看看?
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发表于 2022-8-5 13:13:35 | 显示全部楼层
请叫我黄总 发表于 2021-12-16 14:41
倪老师,我重新发一下我的补偿矩阵。其实我一直有个疑问,用微球做单染管,调补偿的时候,单染管达到横平 ...

就是,如果没有这种做的还可以的单染管,用细胞做也是更乱,在这个基础上微调,会更容易一些。比没有就更好一些
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发表于 2022-8-5 13:32:14 | 显示全部楼层
请叫我黄总 发表于 2021-12-16 14:41
倪老师,我重新发一下我的补偿矩阵。其实我一直有个疑问,用微球做单染管,调补偿的时候,单染管达到横平 ...

去年的帖子,可能当时忽略过去了。 补偿矩阵确实有问题,存在一些负值。单染管用于自动计算补偿,在此基础上,再根据全染样本管最后微调,使得最终矩阵更容易调节。
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