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骨髓 (BM) 抽吸物的质量,很大程度上取决于采集骨髓人员的技能和经验。 一般应取第一管抽吸的小体积 (<5 mL) 骨髓评估残留白血病,以防止外周血 (PB) 稀释(血液稀释)。 事实上,与 BM 相比,PB 中的 MRD 频率大约低 1 个数量级,所以当骨髓样本被血液稀释时,导致假阴性结果的可能性大大增加。
血液稀释已成为评估 MRD 检测可靠性的关键问题。 下面介绍5条检测骨髓被血液稀释程度的公式。
利用红细胞和白细胞比例
需要有匹配的外周血血常规结果
Bone marrow purity = [1-(erythrocytes BM/erythrocytes PB) × (leukocytes PB/leukocytes BM)] × 100%
来源:Holdrinet RS, von Egmond J, Wessels JM, et al. . A method for quantification of peripheral blood admixture in bone marrow aspirates. Exp Hematol. 1980;8:103–107.
利用杆分中性粒、干祖细胞、浆细胞比例
需要标记CD34、CD10、CD38等分析出杆分中性粒、干祖细胞、浆细胞比例
PB contamination index = −3.052 + 0.065 × (%CD10+ neutrophils of granulocytes) −0.609 × (%CD34+)−2.008 × (%plasma cells)
来源:Delgado JA, Guillén-Grima F, Moreno C, et al. . A simple flow-cytometry method to evaluate peripheral blood contamination of bone marrow aspirates. J Immunol Methods. 2017;442:54–58.
利用中晚幼粒细胞比例
未被血液稀释的骨髓活检样本中,中晚幼中性粒(即未成熟中性粒)比例平均为83%,此处作者用80%来替代,通过此比例与真实比例的比值,对原始细胞进行标准化换算。
Normalized blast count = (80%/% dim CD16) × blast count
来源:Loken MR, Chu SC, Fritschle W, et al. . Normalization of bone marrow aspirates for hemodilution in flow cytometric analyses. Cytometry B Clin Cytom. 2009;76:27–36.
利用淋巴细胞和白细胞比例
需要有匹配的外周血血常规结果,这条公式和第1条相似,只是利用的指标不同。
Predicted bone marrow purity = [1 – (Lymphocytes FCM / Lymphocytes PB) × (Leukocytes PB / Leukocytes FCM)] × 100%
来源:Aldawood AM, Kinkade Z, Rosado FG, et al. . A novel method to assess bone marrow purity is useful in determining blast percentage by flow cytometry in acute myeloid Leukemia and Myelodysplasia. Ann Hematol Oncol. 2015;2:1038.
利用肥大细胞比例
这条其实算不上公式,但可给我们一个最直接的无需计算的判断。就是如果肥大细胞(横坐标SSC、纵坐标CD45的话,一般位于中性粒细胞上方,并且CD117表达极高)比例≤0.002%,则可判断被血液稀释了。
Suggested blood contamination if mast cell population (CD117+) ≤ 0.002%
来源:Flores-Montero J, Sanoja-Flores L, Paiva B, et al. . Next Generation Flow for highly sensitive and standardized detection of minimal residual disease in multiple myeloma. Leukemia. 2017;31:2094–2103.
希望以上评估骨髓被血液稀释的公式和指标,能够使你的MRD结果更稳定更准确。
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