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荧光补偿微球究竟是怎么做到能够结合所有种类的抗体的?

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 楼主| 发表于 2022-8-21 16:21:22 | 显示全部楼层 |阅读模式

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Purdue邮件列表中,East Carolina University的Debajit Bhowmick问道:
我很想知道补偿微球是如何制作的。我估计它们表面涂有一些可以与大多数抗体结合的蛋白质。但这是一种什么样的蛋白质,制造商如何让它们在微球上长时间保持稳定?

澳大利亚的Simon Monard做了相当明确的回复(我们在编译时做了一些内容上的润色):
有不同的捕获微球。
大多数用的是4.5um羧基微球,一般表面包被了多克隆抗 Kappa 抗体,因此可以结合各种抗体的kappa链。
也可以包被Protein G 或类似的东西,这类效果可能会更好一些。
微球越大,就可以结合越多的抗体,那么荧光强度肯定会越高。
我一直在使用 4.5um 羧基微球包被多克隆抗大鼠 IgG 或抗小鼠 IgG,制作自己的捕获微球。 加入商品化防腐剂,微球可以在冰箱中存活数年而不会变质。

具体的方法,Simon Monard在今年4月份已发表在Cytometry A杂志上了,文章讲的是用微球结合荧光蛋白、羊抗大鼠IgG、羊抗小鼠IgG。主要用的是polylink protein coupling kit(Polysciences Inc ,目录号24350-1,包含了偶联缓冲液、储存缓冲液和最关键的碳二亚胺 (EDAC))、4.8um羧基微球。简单步骤我们编译分享如下,希望能给FLOWER带来帮助:
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看了上面的原理和步骤,是不是觉得荧光补偿微球其实一点也不神秘吧?

参考文献:Monard S. Building a spectral cytometry toolbox: Coupling fluorescent proteins and antibodies to microspheres [published online ahead of print, 2022 Apr 7]. Cytometry A. 2022;10.1002/cyto.a.24557. doi:10.1002/cyto.a.24557
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