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[其它肿瘤免疫分型] 请教MSLN-CAR-T 细胞在临床上的检测方法

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 楼主| 发表于 2023-1-10 14:52:31 | 显示全部楼层 |阅读模式
5流星
各位大佬好,我们最近准备对病人外周血和腹水中的MSLN-CAR-T 细胞进行检测,我们计划使用荧光标记的MLSN(FITC-MLSN)与MSLN-CAR-T 细胞进行结合,来标记CAR-T细胞,其他还有CD45和CD3抗体,正常空白全血中加入MSLN-CAR-T 细胞后,验证参数(Antibody specificity、Carryover、FMO、A&P)都过了,但是实际样本检测中我们都没有检测到MSLN-CAR-T 细胞,想知道可能导致的原因,希望大家不吝赐教!

我们现在内部认为的原因,可能是因为相较于正常人,病人体内存在较多游离MSLN,已经跟MSLN-CAR-T 细胞结合了,使我们FITC-MLSN无法与MSLN-CAR-T 细胞结合了,导致无法检测到MSLN-CAR-T 细胞。谢谢大家!

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 楼主| 发表于 2023-1-10 15:08:20 | 显示全部楼层
想要向大家请教,我们现在是需要买MSLN标准品吗,用空白血梯度稀释后做验证,然后样本分析中还要增加MSLN的浓度检测吗?谢谢大家
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发表于 2023-1-10 20:25:33 | 显示全部楼层
血清中有游离的Mesothelin吗?这个是GPI锚蛋白,应该是表达在细胞表面,只不过正常组织很少,但肿瘤组织过表达。

另外,不知道你选择的Mesothelin FITC是否确实能结合CAR,如果确实不行,可改用Protein L检测吧。
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发表于 2023-1-10 22:30:56 | 显示全部楼层
你这个是串联了FITC的MSLN重组蛋白吗 我们用B7H3重组蛋白检测体内的B7H3-CAR-T是可以检测到的
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发表于 2023-1-11 08:46:54 | 显示全部楼层
将CAR转进T细胞系,来看看结果。
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 楼主| 发表于 2023-1-13 11:04:48 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-1-10 20:25
血清中有游离的Mesothelin吗?这个是GPI锚蛋白,应该是表达在细胞表面,只不过正常组织很少,但肿瘤组织过 ...

谢谢倪老师的指导,我之前没有相关的项目经验,不知道您那边有什么参考资料可以学习一下吗?麻烦您了
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 楼主| 发表于 2023-1-13 11:08:53 | 显示全部楼层
scaleus 发表于 2023-1-10 22:30
你这个是串联了FITC的MSLN重组蛋白吗 我们用B7H3重组蛋白检测体内的B7H3-CAR-T是可以检测到的 ...

是的,外部连接了FITC的MSLN,现在临床病例中都检测不到CarT细胞,不知道什么原因,我们现在查到说肿瘤组织中高表达,不知道是不是会影响我们荧光抗体与CarT细胞的结合情况,导致我们无法检测到。
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 楼主| 发表于 2023-1-13 11:09:58 | 显示全部楼层
Yuck 发表于 2023-1-11 08:46
将CAR转进T细胞系,来看看结果。

不好意思,因为我之前没有这方面的项目经验,没太明白您的意思,能够帮忙解释一下吗,太感谢了!
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发表于 2023-1-13 13:00:49 | 显示全部楼层
悠游 发表于 2023-1-13 11:04
谢谢倪老师的指导,我之前没有相关的项目经验,不知道您那边有什么参考资料可以学习一下吗?麻烦您了 ...

因为无法确认你采用的Mesothelin FITC 是否能确定与CAR-T结合,所以我觉得是否用Protein L先来测一下更合适,因为Protein L还是用的蛮广泛的。
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 楼主| 发表于 2023-1-13 13:08:40 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-1-13 13:00
因为无法确认你采用的Mesothelin FITC 是否能确定与CAR-T结合,所以我觉得是否用Protein L先来测一下更合 ...

倪老师,我们之前做过验证,特异性是可以的。
试剂信息如下:
试剂名称:FITC-Labeled Human Mesothelin/MSLN(296-580) Protein,Fc Tag
生产厂家:Acro
货号:MSN-HF253
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