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[结构和原理] Dsred用ECD还是PE通道检测?

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发表于 2023-5-22 20:08:47 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
细胞转染了Dsred蛋白,它的最大激发光谱是554nm,最大发射光谱是586nm。使用的仪器有ECD(620/30)和PE(575/25)通道,下面这张图分别选择了ECD/ssc和PE/SSC,在ECD/SSC中,橙色的细胞是Dsred阳性,部分在PE/ssc的阳性信号里呈现。选择哪个通道好一些?通过调节PE的电压,有没有可能使阴阳性细胞分群明显了?另外,有见别人用PECY5检测Dsred的,查了他俩的光谱信息,离的比较远,这个通道应该不合适吧?


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发表于 2023-5-22 21:16:10 | 显示全部楼层
从效果看,应该还是得ECD通道了。
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 楼主| 发表于 2023-5-22 22:07:07 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-5-22 21:16
从效果看,应该还是得ECD通道了。

感谢倪老师这么晚还解答我们的问题,是的,也是感觉ECD好一些,本来是考虑PE的电压没有调,如果增大电压,不知道效果是否会好一些。对了,倪老师,这是同时转染EGFP和Dsred荧光蛋白的细胞,第三和第四张图,用的H和A,差别有点明显。用H就感觉细胞断断续续的,A就比较连贯了,这个请教下您是要怎么解释?
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 楼主| 发表于 2023-5-22 22:27:29 | 显示全部楼层
wmj123456 发表于 2023-5-22 22:07
感谢倪老师这么晚还解答我们的问题,是的,也是感觉ECD好一些,本来是考虑PE的电压没有调,如果增大电压 ...

倪老师,我再补充一张图,选择A之后,断断续续的情况好像没有了,但是选择双指数的时候,负轴有一群EGFP阳性的细胞,是因为它的荧光太强的原因吗?
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发表于 2023-5-23 07:40:58 | 显示全部楼层
wmj123456 发表于 2023-5-22 22:07
感谢倪老师这么晚还解答我们的问题,是的,也是感觉ECD好一些,本来是考虑PE的电压没有调,如果增大电压 ...

A和H,不同的仪器,性能不同,有些仪器A好,有些仪器H好,主要看最后呈现出的分群效果,哪个好选哪个。

从这里看,A相对好看一些,至于ECD负值区域的信号,是ECD-FITC过度补偿了吧
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 楼主| 发表于 2023-5-23 08:17:40 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-5-23 07:40
A和H,不同的仪器,性能不同,有些仪器A好,有些仪器H好,主要看最后呈现出的分群效果,哪个好选哪个。

...

倪老师,我也觉得是补偿的问题,又把他俩重新调了一下,但是总是达不到横平竖直的状态,而且右上角细胞上扬,会不会是本身细胞的问题?这个细胞同时转染了EGFP和Dsred
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发表于 2023-5-23 08:54:04 | 显示全部楼层
wmj123456 发表于 2023-5-23 08:17
倪老师,我也觉得是补偿的问题,又把他俩重新调了一下,但是总是达不到横平竖直的状态,而且右上角细胞上 ...

这已经是调到位的状态了。
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