关于Treg细胞的培养相关问题

果粒橙

最近我刚开始养Treg细胞，目前有几个问题想请教大家，1、为什么要用CD3和CD28一起预先包被，这两个分别起什么作用呢？2、我在培养Treg细胞时，发现培养基里有悬浮的细胞以及板底也有贴着的细胞，想问一下这两种存在分别是什么细胞，然后Treg细胞是悬浮在培养基的还是贴在板底的？3、关于测试药物的作用影响，例如在分化前，分化中，分化后添加药物，我在想如果是分化前干预的话，药物应该干预多久再进行分化，或者在分化中干预的话是刺激因子和药物同时加么，或者在分化后的话，是分化了四五天后再进行药物干预么？4、我用的是大鼠的脾脏，我看的一些分化Treg的方法都是小鼠的，想问下小鼠的方法或者刺激因子的浓度能不能适用于大鼠的，或者能不能推荐下大鼠的刺激因子的浓度。5、细胞在分化过程中长满了，我将它分到了多个孔里继续培养，那还用不用包被，添加的培养基还用不用加刺激因子？希望得到大家的回复，感谢大家😘

niwanmao

1、CD3和CD28是T细胞活化的信号分子，CD3是T细胞受体复合物的一部分，CD28是共刺激分子。在培养Treg细胞时，CD3和CD28可以激活T细胞，促进Treg细胞的分化和扩增。

2、基本上T细胞都是悬浮状态为主，贴壁的细胞究竟是状态不佳的还是正常的T细胞，可以在换液的时候取一点出来，染个色确认一下。

3、药物对Treg细胞分化的影响因药物种类和添加时间不同而异。具体哪个时间点加，得看你们的研究目的而定。

4、大鼠和小鼠的Treg细胞培养方法还是相似的，在存在CD3和CD28单克隆抗体的情况下，用不同剂量的TGFβ(0、5、20 μg/ml），加或不加100 IU hIL-2，在37°C和5%CO2中培养3天。（详见参考文献：CD4+ and CD8+ regulatory T cell characterization in the rat using a unique transgenic Foxp3-EGFP model

5、如果将分化过程中长满了的细胞分到多个孔里继续培养，那么需要重新包被，并且需要添加新的培养基和刺激因子。

果粒橙

niwanmao 发表于 2023-5-25 08:34
1、CD3和CD28是T细胞活化的信号分子，CD3是T细胞受体复合物的一部分，CD28是共刺激分子。在培养Treg细胞时 ...

感谢您的用心回答，我还有两个问题1、那我在后续把长满的细胞分到新的空里，直接在培养基里加CD3和CD28能达到用它两包被的效果么？
2、我用了四个刺激因子，CD3、CD28、IL2、TGFβ，然后培养了两组细胞，就是将naive CD4+细胞铺在CD3和CD28包被后的板里之后，一组是只加IL2，另一组是加IL2和TGFβ，这是我参照别人的方法做的，两组区别是加或不加TGFβ，不太明白IL2和TGFβ的作用原理，培养完事后，第二组是Treg细胞么