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[结构和原理] 光谱流式参考光谱建立

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发表于 2024-7-4 16:57:50 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
请问大家,光谱流式建立参考标准光谱时,全染样本需要固定破膜。

我的问题是:对于单染表染的样本,是否可以不像全染样本一样去固定破膜?(因为我单染仅仅为了得到参考光谱,固定破膜后甚至影响抗体与抗原的结果,导致参考光谱反而不标准)
我这样理解对吗?
所以,表染marker建立参考光谱无需固定破膜?
请问一下大家,我这样理解正确吗?

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发表于 2024-7-4 17:30:44 | 显示全部楼层
不能这么理解。因为固定破膜不仅会影响抗体与抗原的结合,还会影响细胞本身的光谱特征。如果单染表染的样品和其他样品细胞的光谱特征不一致,对结果的影响更大。另外,如果所有样品都按照同样的方法固定破膜,则固定破膜对抗原抗体结合的影响可以忽略。所以,所有样品都需要按照同样的方式固定破膜。
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发表于 2024-7-5 13:21:06 | 显示全部楼层
差异较大且数量较少的标记可能影响不大,可以直接调用。越复杂的抗体方案,越需要单独记录统一条件处理下的细胞光谱,同时也需要有FMO,这和传统流式的方式应该差不多。
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 楼主| 发表于 2024-7-6 23:06:29 | 显示全部楼层
facetodog 发表于 2024-7-5 13:21
差异较大且数量较少的标记可能影响不大,可以直接调用。越复杂的抗体方案,越需要单独记录统一条件处理下的 ...

请问差异大且数量较少怎么理解呢? 我认为既然数量这么少了,是不是更不应该固定破膜,影响抗体结合。
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 楼主| 发表于 2024-7-6 23:08:57 | 显示全部楼层
wxd 发表于 2024-7-4 17:30
不能这么理解。因为固定破膜不仅会影响抗体与抗原的结合,还会影响细胞本身的光谱特征。如果单染表染的样品 ...

前半句十分认同,既然固定破膜对抗体和抗原的结合有所影响,就算所有样本都按同样方法固定破膜,但是对各个抗原的影响也应该是不一样的吧。前面谈到影响细胞本身光谱特征我觉得非常有道理。
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发表于 7 天前 | 显示全部楼层
对照选择我觉得有个接受过程,如果你能完整的证明光谱单染比破膜单染更好,应该也可以被接受。目前都是完全一样操作的对照,最起码能人为排除的破膜因素排除掉了。如果证明非破膜单染比破膜更稳定、更强、更宽的标准光谱便于解析,觉得可以被接受。
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发表于 7 天前 | 显示全部楼层
Veblen 发表于 2024-7-6 23:06
请问差异大且数量较少怎么理解呢? 我认为既然数量这么少了,是不是更不应该固定破膜,影响抗体结合。 ...

抱歉漏了主语,是荧光光谱和荧光数量
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 楼主| 发表于 5 天前 | 显示全部楼层
Yuck 发表于 2024-7-8 08:05
对照选择我觉得有个接受过程,如果你能完整的证明光谱单染比破膜单染更好,应该也可以被接受。目前都是完全 ...

好的,感谢
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