抗凝管的使用

瓜瓜999

做全血的流式，一般每次杀4只老鼠，除了取血还要取其他组织，所以每只老鼠的操作时间大概在15-20分钟左右，然后进行下一只老鼠。

但是有时会有几个抗凝管里的血液会出现凝固现象，之前的操作如下：


1. 从小鼠胸腔用注射器抽取血液后 （①注射器是普通1ml注射器，没有用抗凝剂覆盖注射器内壁，也没有使用针头。②一般能得到500ul-750ul的血，很难取到1ml），立刻注入到EDTA tube里 （EDTA tube是直接买的，容量1.3ml）
2. 来回倒置几次，放在室温下
3. 取其他组织，所有的操作完成后，进行下一只老鼠

4. 所有老鼠完成后，再用RBC lysis buffer进行下一步实验...

有的抗凝管血液没有凝固，有的凝固了，请问是哪一步操作有问题吗，非常感谢~

niwanmao

应该还是抗凝剂不足的缘故，这些抗凝管内抗凝剂是液体的还是涂布在管壁看不见？其实可以自己配制EDTA抗凝剂的，更稳妥一些，至少保证抗凝剂量

瓜瓜999

niwanmao 发表于 2024-11-25 08:38
应该还是抗凝剂不足的缘故，这些抗凝管内抗凝剂是液体的还是涂布在管壁看不见？其实可以自己配制EDTA抗凝剂 ...

谢谢老师回复~
我们买的抗凝管的K3 EDTA是以喷雾涂层形式存在。官网上写的volume of work是1.3ml，一般我们也就只能取500-750ul。（https://www.sarstedt.com/en/prod ... roduct/41.1395.005/）

我们之前即使取同样量的血液，有的血液就凝固了，有的没有凝固。不知道哪里出现了问题。

niwanmao

瓜瓜999 发表于 2024-11-25 16:03
谢谢老师回复~
我们买的抗凝管的K3 EDTA是以喷雾涂层形式存在。官网上写的volume of work是1.3ml，一般 ...

跟人一样，小鼠血样也有个体差异

首先确保是否真的充分混好了，如果确保充分混匀了还这样的话只能自己配制一些EDTA溶液去额外加了

瓜瓜999

niwanmao 发表于 2024-11-25 16:21
跟人一样，小鼠血样也有个体差异

首先确保是否真的充分混好了，如果确保充分混匀了还这样的话只能自己配 ...

谢谢老师的建议~

mark

我们之前实验也遇到血凝了的情况，当时师兄说的是还需要考虑取血的时候尽量避免碰到鼠毛发、胡须的情况，导致外源性凝血。

瓜瓜999

mark 发表于 2024-11-27 23:42
我们之前实验也遇到血凝了的情况，当时师兄说的是还需要考虑取血的时候尽量避免碰到鼠毛发、胡须的情况，导 ...

也有可能，下次取血的时候我注意一下，谢谢提醒~