C57小鼠淋巴细胞分群异常

w67890011

其中FITC是CD3+T PE/CY7是CD19+B

各位老师，请问为什么我用流式跑出来C57小鼠外周血样本中淋巴细胞位置会分出多个群落？而且三个明显群落都有CD3 CD19表达，B细胞的比例也异常偏高了。裂解液也更换过，但没什么明显差别，跑了四次均是这种情况，是机器的问题吗？还是说C57小鼠就会这样？

niwanmao

P1是凋亡

P2和P3均正常，但分成SSC不同的两群，还是考虑裂解液的影响

PS：建议做图的时候，把抗体名称标记在坐标轴上。否则其它人不知道你究竟染了啥

w67890011

niwanmao 发表于 2025-7-24 11:11
P1是凋亡

P2和P3均正常，但分成SSC不同的两群，还是考虑裂解液的影响

好的，谢谢老师，FITC是CD3 PE/CY7是CD19，换了BD裂解液后才出现的P2 P3分群，原来的裂解液确实没有这个情况，但为什么我的凋亡这么多，我看文献或者其他人的做的C57小鼠是没有太明显P1群的，而且未经过任何处理过的C57小鼠B细胞会有80%这么高吗，我看文献大概也就45%-60%左右的样子

niwanmao

w67890011 发表于 2025-7-24 11:16
好的，谢谢老师，FITC是CD3 PE/CY7是CD19，换了BD裂解液后才出现的P2 P3分群，原来的裂解液确实没有这个情 ...

为什么不换回原来的裂解液呢？

ZRX

你说的80%直接在P3这里看的，你要算成占总白细胞的比例。而且BD的555899这个裂红液算不错的，考虑样本问题。你的FSC电压高吗

w67890011

ZRX 发表于 2025-8-25 13:57
你说的80%直接在P3这里看的，你要算成占总白细胞的比例。而且BD的555899这个裂红液算不错的，考虑样本问题 ...

尝试了几个裂解方案，发现是裂解过度了，裂解时间太久导致细胞损伤，BD这个确实是没问题