多倍体细胞分选

Jessiechen

老师，您好，我想通过流式分选出肿瘤细胞中的四倍体细胞，现在遇到了几个问题，想向您请教一下。由于要继续养，我用的是hochest 33342染料，用的是V450通道。
1、我发现FSC-A, SSC-A图中有两群细胞，这是否就是二倍体和非整倍体的分群？

2、我就所有细胞圈出后，通过FSC-A和FSC-H进行去黏连后进行细胞周期分析，发现完全无法拟合cell cycle曲线，无法计算DNA指数。


3、于是，我用V450和FSC-A想认为圈G1，G2，S，M期，发现图中仍有两群细胞，正是前面发现的那两群，但图形不完全符合应有的周期的分布。老师，请问我该如何圈画以分出肿瘤中的四倍体细胞，请不吝赐教，感激不尽？

wxd

做细胞周期拟合时，荧光通道（在你这个实验里是V450）要改成线性。去除粘连细胞后，直接用单细胞群来做拟合，没必要设置FSC-A/FL-1-A坐标系来继续圈。

niwanmao

1、你这个样本，是否同时存在正常细胞和肿瘤细胞？是否确认过
2、按@wxd 站友所说的那样，用FL1-A/FL1-H展示，且两个坐标都用线性坐标，排除粘连体。
3、如果样本中同时存在正常细胞，那么二倍体就有参照了，根据倍数关系找到四倍体，但需要事先利用标准品把电压调到合适的位置，才能找出正确的倍性关系，否则就只能估计。