细节与思维的深度碰撞，记流式中文网第33次线下聚会（杭州站）

niwanmao

2025年12月20日，冬月初一，杭州城虽雾霾朦胧，令人初觉不悦，但气温却温润如春，恰似流式技术爱好者们的心境——纵使面对再繁琐的技术难题，也能沉静思索，并在每年此时如期相聚。以思想为火，以交流为炉，共冶智慧，点亮迷雾中的路径。

上午9时整，我作为流式中文网创始人，为第33次流式中文网线下聚会开场，简要回顾了平台十余年来走过的线下足迹，向所有在场与云端的流式“发烧友”表示热烈欢迎，随即便将众人引入精彩纷呈的分享环节。



一、 科研流式的实战艺术：于细微处见真章

首位分享嘉宾：沈筱芸——《科研流式实战：从关键细节到可靠数据》



沈老师从“实验失败案例”切入，生动列举了抗体污染、细胞状态不佳、配色方案不合理、仪器预约错误等常见“坑点”。她强调，可靠的样本和试剂是成功的基石，尤其对借用的细胞系或抗体，务必进行效价和状态验证。她通过案例指出，一个看似简单的CD206本底信号问题，最终溯源至细胞系本身经过基因编辑，导致后续功能实验失败。

在方案设计与优化部分，沈老师详细讲解了：

• 抗体滴定的重要性，强调必须使用正式实验的同种样本。
• 电压调节的新理念：建议先上全染管确定最佳电压，因其一旦设定无法后期调整，而补偿和圈门可线下反复优化。
• 圈门逻辑的四大原则（层级化、对照依赖性、逻辑性、位置合理性）以及统计方式的选择（百分比用于独立表达抗原，平均荧光强度用于连续表达抗原）。
  

现场讨论金句：“我们的整个科研流式，就是一个用实践去验证我们假说的过程，需要不断动态调整，但切记不要盲从文献。”



二、 小指标，大乾坤：淋巴亚群在感染预后中的妙用

第二位分享嘉宾：张龙一——《淋巴细胞亚群在感染性疾病评估中的应用》



张老师深入浅出地阐述了如何利用简单的淋巴细胞亚群结合活化指标（如CD38/HLA-DR for T细胞，CD19/CD27/CD38 for 浆母细胞）评估感染进程和免疫功能。他通过七个典型病例，生动验证了若干核心知识点：

• 感染早期外周血淋巴细胞会显著下降。
• 感染3-5天后，适应性免疫细胞（T、B细胞）开始活化、增殖。
• 细菌感染常引起CD4+T细胞和B细胞升高，而病毒/胞内菌感染则主要激发CD8+T细胞应答。
• 感染后期，若淋巴细胞绝对值能快速回升，提示免疫功能良好；反之则预示免疫功能较差。
• 警惕特殊情况：如发热伴血小板减少综合征（SFTS）病毒可直接感染B细胞，导致浆母细胞增多，但这并非预后良好的标志，反而是病毒储存库的体现。
  

张老师指出，对感染患者而言，在发病后3-5天左右检测淋巴亚群并结合活化指标，价值最大。

现场互动：与会者就移植后感染、不同发热原因的鉴别等临床棘手问题与张老师进行了热烈探讨。



三、 追求极致：从仪器性能优化多色检测结果

第三位分享嘉宾：王婷婷——《荧光溢出的另一面：基于仪器性能优化流式多色检测结果》



这份内容将大家的视角引向了多色流式背后的硬核参数——荧光扩散误差（Spreading Error, SE）。她指出，SE是除电压和补偿外，影响多色panel结果准确性和可重复性的关键因素，且与仪器硬件、荧光素特性及抗原表达强度密切相关。

她系统介绍了如何通过计算和解读Spillover Spreading Matrix (SSM) 来评估仪器性能，并指导多色panel设计：

• 高总SE值的荧光素应搭配互斥表达的抗原。
• 易受其它染料SE影响的检测通道不宜安排弱表达抗原。
• 以14色人外周血panel为例，展示了从目标定义、仪器优化、SSM计算、Panel设计、抗体滴定到单染/FMO验证的全流程优化策略。
  

技术热点：现场观众就SSM矩阵的校准频率、传统流式与光谱流式在SE上的差异、以及FC Blocking在减少非特异性结合中的应用等进行了深入交流。



四、 文献启迪：肥胖环境下的巨噬细胞角色

第四位分享嘉宾：陈慧——《肥胖和巨噬细胞》



陈慧带来了一场扎实的文献导读，系统梳理了肥胖如何作为“炎症的土壤”，通过脂肪细胞肥大、缺氧等机制，改变脂肪组织微环境，进而影响其中巨噬细胞（ATM）的极化状态。在瘦个体中，ATM以抗炎的M2型为主；而在肥胖状态下，促炎的M1型ATM显著增多，并形成“ crown-like structures ”环绕坏死脂肪细胞，加剧胰岛素抵抗和代谢紊乱。

她还介绍了一类新型巨噬细胞——交感神经元相关巨噬细胞（SAM），它们通过调控去甲肾上腺素水平影响脂肪分解和产热，同样在肥胖进程中发生数量和表型的变化。



五、 答疑解惑


大多数情况下，每次聚会，我都会在会前征集大家要问的问题，针对会前征集的问题进行专题讨论。这是聚会的一个传统。

这次的“知识礼包”包括了：

• 儿科罕见病的流式应用：如原发性免疫缺陷病（SCID、WAS等）、慢性肉芽肿病（DHR检测）、PNH克隆检测、溶酶体贮积病等的流式诊断策略。
• 实验技术难题：如PMA/离子霉素刺激后CD4内吞的解决方案（建议尝试胞内染色或更换抗体克隆号）、胞内染色效率低下的可能原因及优化方法。
• 就组织驻留巨噬细胞的分群策略、不同组织来源髓系细胞解离方法等实际难题分享文献设门策略，并与提出问题的站友进行互动讨论。
• 组织解离方案：分享了肾脏、心脏等实体组织获取高质量单细胞悬液的文献方法和优化思路。
  

现场同仁结合自身实验中的困惑和经验，相互之间进行了热烈讨论，实现了从理论到实践的完美闭环。

相聚有时，未来可期

活动最后，全体与会者合影留念，为本次充满干货的聚会画上圆满句号。



本次聚会通过流式中文网平台直播，吸引了1225人次线上观看。2026年流式中文网线下聚会将继续在3月（广州）、6月（上海）、9月（北京）、12月（杭州）举行。我们诚邀各地流式爱好者届时参加，线下的交流，好处道不尽。让我们期待下一次的思维碰撞！