流式抗体也可以用于磁珠分选

niwanmao

qq969385787 发表于 2015-6-24 12:16
老师您好，想请教几个问题。
1、这个buffer是自己配的？跟美天旎的MACS Buffer是一样的吗？740元50ml；
2 ...

我只看过研究生分选过，只能谈一点我所了解的。

1、知道成份，肯定是可以自己配，但是需要验证过没有问题。
2和3我记得看到研究生分选时都是重力，不知道加压行不行，从原理上说，加压应该会影响纯度。
4、取 1×10E7就是细胞计数啊，基本操作呢。：）

小憨

不仅有抗PE的，还有抗FITC的磁珠，还有抗His的磁珠，还有抗Biotin的，选择挺多的

ghqiu09

niwanmao 发表于 2015-6-24 14:27
我只看过研究生分选过，只能谈一点我所了解的。

1、知道成份，肯定是可以自己配，但是需要验证过没有问 ...

看到了两年前的帖子了，补充一下，加压是绝对不行的，因为我试过

refusetolove

想请教下大家，我一直在用美天旎的130-091-041分选CD4+CD25+T细胞，之前的试剂盒是2013年的不太好使了，分选的CD4+CD25-细胞的纯度是27%，CD4+CD25+细胞的纯度是14%。我感觉是磁珠抗体失效了，毕竟已经过期5年了，我就新买了一个试剂盒，大概18年10月过期，我完全按照说明书做了一次，只是过了两个LS柱子。结果第一次阴选CD4+细胞占总细胞的21%，第二次过LS柱子CD4+细胞占总细胞的29%。阳选后，CD4+CD25-细胞占总细胞的24.5%，CD4+CD25+T细胞占总细胞的35.7%。
不知道是哪里出了问题，我在16年第一次做这个实验的时候，纯度大概50%，我今年分选了6次，因为没意识到抗体失效，我多次尝试，修改其他条件，包括重新配制MACS buffer，使用自己配置的红细胞裂解液，尝试使用多个LS柱子。但是我的实验结果并没有什么改观，多使用的LS柱子，的确提高了一点纯度，但也只是从15%到20%。我重新购买了试剂盒后，再一次尝试，发现也只是35.7%，所以想真诚地请教大家，不知道自己是哪里出了问题，我的流式分析纯度图片，添加在了附件中。

我其实还有几个问题
1.LS柱子需要使用多个吗，还是大家也是只用一个？
2.大家抗体的使用量是完全按照说明书的吗?我是完全按照说明书的，但是我不知道这样抗体会不会多余，从而出现抗原抗体反应前带现象。因为我得知有些人对纯度要求不高使用的抗体量比较少。
3.因为我还需要CD4+CD25-T细胞做对照，这个分选能同时保证CD4+CD25-细胞的纯度吗？
4.我自己分析我的流式图，感觉杂细胞大部分不是淋巴细胞，这个能通过前期对细胞处理，从而提高纯度吗，比如使用尼龙毛柱，先富集淋巴细胞。但是这样延长了提取细胞的时间，可能细胞状态会有所下降。

谢谢大家。